[發(fā)明專利]特異性檢測轉(zhuǎn)基因大豆DP-305423的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210059606.3
• 申請日: 2012-03-08
• 公開（公告）號: CN102586308A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊正友;孫昌雷;趙鳳春;李文華
• 申請（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/66;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種特異性檢測轉(zhuǎn)基因大豆DP-305423的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子及其應(yīng)用，屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

近年來，玉米、大豆、油菜、棉花、番茄等轉(zhuǎn)基因作物已在許多國家允許種植和生產(chǎn)，并被廣泛用作食品或飼料的加工原料。由于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品存在著生態(tài)風(fēng)險和食品安全等一系列的問題，因此，世界各國政府和相關(guān)國際組織紛紛制定相應(yīng)的安全管理法規(guī)，加強(qiáng)遺傳改良作物的規(guī)范管理，并對遺傳改良作物及其產(chǎn)品實(shí)施標(biāo)識制度。我國于2001年5月9日公布并實(shí)施《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理?xiàng)l例》，并在2002年1月5日公布了農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評價、標(biāo)示和進(jìn)口安全管理三個配套管理辦法。為了應(yīng)對遺傳改良作物管理相關(guān)的法律法規(guī)和制度，建立高效、快速、特異的檢測技術(shù)十分必要，它是各國際組織和國家管理遺傳改良作物的有力技術(shù)支撐。

目前已經(jīng)發(fā)展并廣泛應(yīng)用的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測方法有兩類：一類是基于核酸水平的檢測，另一類是基于蛋白質(zhì)水平的免疫學(xué)檢測。基于核酸的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測技術(shù)因具有高靈敏度和特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，已成為目前最重要、應(yīng)用最廣泛的遺傳改良作物及其產(chǎn)品檢測技術(shù)。不論采用基于核酸還是基于蛋白質(zhì)的方法，在進(jìn)行轉(zhuǎn)基因檢測時都應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為陽性對照，以確保檢測過程的有效和檢測結(jié)果的可靠性。目前，用于轉(zhuǎn)基因檢測的陽性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)主要是用純合的轉(zhuǎn)基因植物材料配置的，位于比利時的歐盟聯(lián)合研究中心下屬的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與測量研究所(Institute?for?Reference?Materials?and?Measurements，IRMM)專業(yè)配制和提供用于轉(zhuǎn)基因定量PCR檢測的陽性標(biāo)準(zhǔn)品。到目前為止僅能得到十幾種在市場上銷售的遺傳改良作物的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。但這類來源于農(nóng)產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其必須有專門的研究機(jī)構(gòu)來制備，貯存和測定過程受很多因素影響，很難維持恒定的量，價格昂貴，而且，這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的轉(zhuǎn)基因含量范圍一般是從0.1%到5%，而實(shí)際檢測的樣品中的轉(zhuǎn)基因含量可能會超出這個范圍。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的缺乏已成為檢測方法建立和應(yīng)用的瓶頸，阻礙了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)識制度的順利實(shí)施。

標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子是一種重組質(zhì)粒分子，其中一般包含轉(zhuǎn)基因作物檢測的外源基因片段或品系特異性片段以及物種特異性片段。標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子的優(yōu)點(diǎn)主要是可以通過微生物進(jìn)行大量培養(yǎng)，純度較高；且操作容易，穩(wěn)定性高，同一個標(biāo)準(zhǔn)分子可以同時包含多個外源目的基因和內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因，經(jīng)濟(jì)高效。近年來，越來越受到各國轉(zhuǎn)基因檢測專家和學(xué)者們的重視，并逐漸取代傳統(tǒng)陽性標(biāo)準(zhǔn)品用于轉(zhuǎn)基因品系及其加工產(chǎn)品的PCR檢測。

轉(zhuǎn)基因大豆DP-305423品系由先鋒公司研發(fā)，已先后在美國、加拿大和日本三國批準(zhǔn)環(huán)境釋放，并在澳大利亞、韓國、菲律賓、墨西哥等8個國家和地區(qū)批準(zhǔn)用于食品和飼料加工原料。我國雖然不種植轉(zhuǎn)基因大豆，但每年都進(jìn)口幾千萬噸轉(zhuǎn)基因大豆用于食品或飼料加工原料。迄今為止，還沒適用于轉(zhuǎn)基因大豆DP-305423品系檢測的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子的報道。為了給中國轉(zhuǎn)基因大豆品系監(jiān)管提供必要的技術(shù)支撐，有必要開發(fā)適用于轉(zhuǎn)基因大豆DP-305423品系特異性檢測的、穩(wěn)定可靠的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種特異性檢測轉(zhuǎn)基因大豆DP-305423的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子及其應(yīng)用，本發(fā)明的目的在于提供特異性檢測轉(zhuǎn)基因大豆品系DP-305423的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子、其構(gòu)建方法及應(yīng)用。

本發(fā)明所提供的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子，其包含以下序列片段：DP-305423品系特異性片段和大豆內(nèi)源標(biāo)準(zhǔn)基因Lectin的特異序列片段。?

所述的DP-305423的品系特異性序列，指的是轉(zhuǎn)基因大豆品系DP-305423的外源插入載體與大豆基因組鄰接區(qū)的DNA序列如SEQ?ID?NO:1所示。

所述大豆內(nèi)源標(biāo)準(zhǔn)基因Lectin特異性片段，指的是大豆凝集素基因片段，其DNA序列如SEQ?ID?NO:2所示。

所述的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子的骨架質(zhì)粒是pMD18-T。

所述的用于轉(zhuǎn)基因大豆檢測的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子，其中用于構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子的引物序列如下（表1）：??

表1?構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子的PCR引物

所述的用于轉(zhuǎn)基因大豆檢測的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子的構(gòu)建方法，包括以下步驟：