[發明專利]一種眼斑擬石首魚的抗蟲肽及其基因克隆方法和應用

有效

• 申請號: 201210058856.5
• 申請日: 2012-03-07
• 公開（公告）號: CN102586258A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 毛勇;王軍;金媛;牛素芳;鄔陽
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/10;C07K14/46;A61K38/17;A61P33/02
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 馬應森

1.眼斑擬石首魚的抗蟲肽piscidin的cDNA全長序列，其特征在于其核苷酸序列記為序列1，所述序列1為：

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gtactgcggt?ctttcttgtg?ttgttcatgg?tcgttctcat?ggctgaacct?ggagagtgta????120

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aaa??????????????????????????????????????????????????????????????????423。

2.眼斑擬石首魚抗蟲肽piscidin的氨基酸序列，其特征在于記為序列2，所述序列2為：

Met?Lys?Cys?Thr?Ala?Val?Phe?Leu?Val?Leu?Phe?Met?Val?Val?Leu?Met

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Ala?Glu?Pro?Gly?Glu?Cys?Ile?Trp?Gly?Leu?Ile?Ala?His?Gly?Val?Ala

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His?Val?Gly?Ser?Leu?Ile?His?Gly?Leu?Val?Asn?Gly?Asn?His?Gly?Gly

????????????????15??????????????????20??????????????????25

Asn?Gln?Ala?Glu?Glu?Gln?Gln?Glu?Gln?Leu?Asn?Lys?Arg?Ser?Leu?Ser

????????????30??????????????????35??????????????????40

Tyr?Asp?His?Pro。

3.如權利要求2所述的眼斑擬石首魚抗蟲肽piscidin的氨基酸序列，其特征在于所述氨基酸序列組成的多肽包含信號肽、成熟肽和優勢域三個部分。

4.如權利要求2所述的眼斑擬石首魚抗蟲肽piscidin的氨基酸序列，其特征在于所述成熟肽序列，即抗蟲肽，是編碼22個氨基酸，具有兩親性α螺旋結構，含有堿性氨基酸，具體的序列命名為So-Piscidin：Ile?Thr?Gly?Leu?Ile?Ala?His?Gly?Val?Ala?His?Val?Gly?Ser?Leu?Ile?His?Gly?Leu?Val?Asn?Gly。

5.眼斑擬石首魚piscidin的cDNA全長序列的克隆方法，其特征在于包括以下步驟：

1)利用刺激隱核蟲感染眼斑擬石首魚，誘導并提高抗蟲肽piscidin的表達水平；

2)利用感染后鰓部出現明顯“白點”的眼斑擬石首魚的頭腎提取總RNA，然后反轉錄成cDNA作為PCR模板，此模板能有效擴增出抗蟲肽的cDNA或片段；

3)參考魚類piscidin的cDNA序列設計同源引物，利用RT-PCR和RACE等技術，克隆眼斑擬石首魚piscidin的cDNA全長序列。

6.眼斑擬石首魚的抗蟲肽piscidin在制備防治刺激隱核蟲病藥物中的應用。