[發(fā)明專利]結(jié)合分子

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210057668.0
• 申請日: 2005-07-22
• 公開（公告）號: CN102659940B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅杰·金登·克雷格;F·G·格洛斯費(fèi)爾德;R·W·楊森斯;D·德拉貝克
• 申請（專利權(quán)）人: 伊拉茲馬斯大學(xué)鹿特丹醫(yī)學(xué)中心;羅杰·金登·克雷格
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;A61K39/395;A61P37/00
• 代理公司: 北京睿陽聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11758
• 代理人: 張穎;景鵬

1.產(chǎn)生僅有V_H重鏈的抗體的方法，所述方法包括：

(a) 提供表達(dá)異源V_H重鏈基因座的轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物，其中：

(i) 所述V_H重鏈基因座包含可變區(qū)和至少一個(gè)重鏈恒定區(qū)，所述可變區(qū)包含至少一個(gè)天然存在的V基因片段、至少一個(gè)D基因片段和至少一個(gè)J基因片段，其中所述V、D和J基因片段源自于人；

(ii) 每個(gè)恒定區(qū)不編碼功能性C_H1域；

(iii) V基因片段、D基因片段和J基因片段能夠重組而形成VDJ 編碼序列；

(iv) 每個(gè)重鏈恒定區(qū)來源于脊椎動(dòng)物，但非來源于人類；

(v) 重組后的V_H重鏈基因座在表達(dá)時(shí)，能夠形成僅有重鏈的抗體；

(b) 用抗原免疫所述轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物，

其中所述哺乳動(dòng)物是小鼠，并且該哺乳動(dòng)物內(nèi)源性的免疫球蛋白重鏈基因座缺失或被沉默。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物經(jīng)工程改造，其產(chǎn)生含輕鏈的抗體的能力降低。

3.權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)的方法，其中所述免疫包括將抗原注射進(jìn)所述轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物中，并且其中所述方法包括下述的額外步驟：

(c) 分離表達(dá)所需抗原特異性、僅有重鏈的抗體的細(xì)胞或組織；

(d) 從步驟(c)的細(xì)胞或組織產(chǎn)生雜交瘤；

(e) 從所述雜交瘤克隆僅有重鏈的抗體mRNA；和

(f) 在異源表達(dá)體系中生產(chǎn)所述僅有重鏈的抗體。

4.產(chǎn)生V_H結(jié)合域的方法，其包括權(quán)利要求 1-2 中任一項(xiàng)的步驟，其中所述免疫包括將抗 原注射進(jìn)所述轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物中，并且其中所述方法包括下述的額外步驟：

(c) 分離表達(dá)所需抗原特異性、僅有重鏈的抗體的細(xì)胞或組織；

(d) 從步驟(c)的細(xì)胞或組織產(chǎn)生雜交瘤；

(e) 從所述雜交瘤克隆僅有重鏈的抗體mRNA；

(f) 從步驟(e)的克隆 mRNA 中鑒定并分離抗原特異性V_H域；和

(g) 在異源表達(dá)體系中生產(chǎn)可溶性的抗原特異性 V_H 結(jié)合域。

5.產(chǎn)生 V_H 結(jié)合域的方法，其包括權(quán)利要求 1-2 中任一項(xiàng)的步驟，其中所述免疫包括將抗原注射進(jìn)所述轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物中，并且其中所述方法包括下述的額外步驟：

(c) 分離表達(dá)可溶性的所需抗原特異性、僅有重鏈的抗體的細(xì)胞或組織；

(d) 從來源于所分離細(xì)胞或組織的 mRNA 克隆V_H基因座；

(e) 使用噬菌體或類似文庫展示編碼的蛋白質(zhì)；

(f) 鑒定可溶性的抗原特異性V_H域；且

(g) 表達(dá)所述可溶性的抗原特異性V_H域，或作為融合蛋白表達(dá)所述可溶性的抗原特異性V_H域。

6.權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述 V_H 重鏈基因座包含含有超過一個(gè)V基因片段、超過一個(gè)D基因片段和超過一個(gè)J基因片段的可變區(qū)。

7.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述 V_H 重鏈基因座包含含有超過一個(gè)V基因片段、超過一個(gè)D基因片段和超過一個(gè)J基因片段的可變區(qū)。

8.權(quán)利要求4或5所述的方法，其中所述 V_H 重鏈基因座包含含有超過一個(gè)V基因片段、超過一個(gè)D基因片段和超過一個(gè)J基因片段的可變區(qū)。