[發(fā)明專利]一種治療新城疫的新型卵黃抗體及其制作方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201210056799.7
• 申請日: 2012-03-07
• 公開（公告）號: CN102584991A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設計）人: 王慶福;萬徐萍;劉易通;紀雯婧;李振天
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東紫金正天藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/02;A61P31/14
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 李彥孚

技術(shù)領域

本發(fā)明屬于動保行業(yè)獸用生物制品領域，所提供新型卵黃抗體用于檢測、預防和治療新城疫病毒感染。

背景技術(shù)

雞新城疫是一種具有高度傳染性的病毒性疾病，各種品種、年齡、性別的雞都易感染，發(fā)病率和死亡率在90%以上，是嚴重危害養(yǎng)雞生產(chǎn)的最主要疾病之一。在西方發(fā)達國家往往采取以撲殺強毒感染群為主的方法；而在我國，由于經(jīng)濟發(fā)展水平的限制以及強毒感染的普遍存在，主要通過應用疫苗進行免疫接種來控制新城疫的發(fā)生，由于新城疫疫苗種類繁多，質(zhì)量參差不齊，臨床疫苗使用方法不一，往往會因疫苗的選擇和使用不當造成免疫失敗，給養(yǎng)雞生產(chǎn)帶來極大的經(jīng)濟損失，近年來的實踐證明不明原因的免疫失敗普遍存在。

近年來，隨著食品安全問題的日益嚴重，化學藥物的使用大大受到限制，以往臨床使用的鹽酸嗎啉胍、金剛烷胺等抗病毒藥物已經(jīng)由農(nóng)業(yè)部禁止使用，而卵黃抗體作為一種安全、高效、無公害的生物制品，來源廣泛、品質(zhì)優(yōu)良且價格低廉，在臨床上用于動物疾病的治療和診斷，具有廣闊的市場前景。

當前卵黃抗體提取純化方法有乙二醇提取法、氯仿提取法、辛酸萃取法、鹽析法等，這些方法收率低、雜蛋白多、產(chǎn)品活性低。雖然市場上曾經(jīng)一度流行使用卵黃抗體，但由于技術(shù)水平所限，真正起到治療作用的難覓其蹤。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種治療新城疫的新型卵黃抗體及其制作方法。

制作步驟如下：

第一步驟，購買雞新城疫活疫苗（C30-86株）、雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)存儲于-15℃以下備用；購買注射用生理鹽水、雞新城疫滅活疫苗存儲于2～8℃?zhèn)溆?

第二步驟，購買經(jīng)檢疫合格的SPF蛋雞雛作隔離飼養(yǎng);

第三步驟，分別于7日齡、21日齡給全雞群做雞新城疫活疫苗（C30-86株）免疫，飲水途徑，劑量分別依次為2羽份、4羽份;

第四步驟，在70日齡時，在雞胸部左側(cè)皮下注射2羽份雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)；右側(cè)皮下注射2羽份雞新城疫滅活疫苗;

第五步驟，在100日齡時，在雞胸部左側(cè)皮下注射4羽份雞新城疫滅活疫苗；在頸部皮下注射4羽份雞新城疫中等毒力活疫苗(I系);

第六步驟，在140日齡時，給全雞群做雞新城疫活疫苗（C30-86株）免疫，飲水途徑，劑量為10羽份;

第七步驟，自150～160日齡起收集新城疫抗體水平10以上的雞蛋保存在4℃環(huán)境備用;

第八步驟，在超凈臺上收集蛋黃，按3倍比例加入滅菌蒸餾水攪拌30分鐘以上，配成均一的蛋黃液，轉(zhuǎn)移至4℃環(huán)境冷藏、靜置12小時，用過濾氣泵回收上清液;

第九步驟，將含卵黃抗體的蛋黃上清液依次通過0.45微米和0.22微米的濾膜進行超濾濃縮，收集介于兩種濾膜之間的物質(zhì)即為卵黃抗體的濃縮液;

第十步驟，將卵黃抗體濃縮液做50～56℃減壓干燥，制成卵黃抗體干粉，方便保存；

第十一步驟，將卵黃抗體干粉按照一定的劑量分裝即可。

本方法利用適當?shù)拿庖叱绦颢@得高效價雞蛋，利用蛋白質(zhì)的親水性特點，通過沉降法將卵黃抗體與脂類分離，且在濃縮過程中不破壞卵黃抗體的空間結(jié)構(gòu)而出去雜蛋白，充分保護了卵黃抗體的生物活性和純粹性，所制造的卵黃抗體純度高、活性強；本發(fā)明所提供的新型卵黃抗體提取純化方法，能最大限度將卵黃中特定的新城疫抗體從雜蛋白中分離出來而純化濃縮過程不對卵黃抗體產(chǎn)生破壞作用，不影響產(chǎn)品生物活性，并且包含基因型????????????????????????????????????????????????和基因型的新型新城疫抗體，使用范圍更廣闊，能夠覆蓋新城疫強毒感染的全部范圍；本發(fā)明所提供的卵黃抗體干粉，可在符合GMP要求的環(huán)境下與葡萄糖、乳糖等適宜輔料以適當比例可配制成粉劑、溶液劑、注射液、注射用粉劑等臨床適用劑型，可用于診斷、預防和治療新城疫病毒感染。

具體實施方式

實施例：

①蛋雞的免疫

購買SPF蛋雞雛，分別于7日齡、21日齡給全雞群做雞新城疫活疫苗（C30-86株）免疫，飲水途徑，劑量分別依次為2羽份、4羽份。

在70日齡時，在雞胸部左側(cè)皮下注射2羽份雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)；右側(cè)皮下注射2羽份雞新城疫滅活疫苗。

在100日齡時，在雞胸部左側(cè)皮下注射4羽份雞新城疫滅活疫苗；在頸部皮下注射4羽份雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)。

在140日齡時，給全雞群做雞新城疫活疫苗（C30-86株）免疫，飲水途徑，劑量為10羽份。