[發明專利]胸水a-L-巖藻糖苷酶的檢測方法

無效

• 申請號: 201210056263.5
• 申請日: 2012-03-06
• 公開（公告）號: CN102586398A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 張弘;李峰;魏群;朱郁飛;許可銀;陳懇;張莉娜
• 申請（專利權）人: 南通大學附屬醫院
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34
• 代理公司: 南通市永通專利事務所 32100
• 代理人: 葛雷

技術領域

本發明涉及一種胸水a-L-巖藻糖苷酶的檢測方法。

背景技術

胸水的形成機制較為復雜。胸水的脫落細胞學檢查是金標準，特異性高，但陽性率低。胸水a-L-巖藻糖苷酶(AFU)是一種溶酶體酸性水解酶，廣泛存在于哺乳動物的細胞和體液中，其主要生理功能是參與含巖藻糖基的糖蛋白、糖脂等生物活性大分子物質的分解代謝。尋求一種簡便實用的胸水a-L-巖藻糖苷酶檢測方法是人們長期以來追求的目標。

發明內容

本發明的目的在于提供一種試劑來源方便，方法簡便快速，成本低廉的胸水a-L-巖藻糖苷酶的檢測方法。

本發明的技術解決方案是：

一種胸水a-L-巖藻糖苷酶的檢測方法，其特征是：包括下列步驟：

(1)將人胸水50μl與基質液200μl混合放入測定管中，混勻后置于37℃水浴反應60分鐘，再與1250μl顯色液混勻后，在生化分析儀中檢測405nm處的吸光度值，為A測；

(2)將人胸水50μl與緩沖液200μl混合放入對照管中，混勻后置于37℃水浴反應60分鐘，再與1250μl顯色液混勻后，在生化分析儀中檢測405nm處的吸光度值，在生化分析儀中檢測405nm處的吸光度值，為A_對；

(3)將50μl標準品與200μl基質液混勻后，置于37℃水浴反應60分鐘，再與1250μl顯色液混勻后，在生化分析儀中檢測405nm處的吸光度值，為A_標；

(4)按下列公式得到人胸水a-L-巖藻糖苷酶的活性：胸水AFU活性(μmol/L·h)＝(A_測-A_對)/A_標×400；

所述基質液是濃度為400μmol/L的對硝基酚-a-L-巖藻糖苷；所述緩沖液是pH5.2的醋酸緩沖液；所述顯色液是pH?10.7的甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液；所述標準品是濃度為400μmol/L的對硝基酚。

本發明具有試劑來源方便，方法簡便快速，成本低廉的優點，是一個比較理想的檢測方法，適合于基層單位的應用。

下面結合實施例對本發明作進一步說明。

具體實施方式

一種胸水a-L-巖藻糖苷酶的檢測方法，包括下列步驟：

(1)將人胸水50μl與基質液200μl混合放入測定管中，混勻后置于37℃水浴反應60分鐘，再與1250μl顯色液混勻后，在生化分析儀中檢測405nm處的吸光度值，為A測；

(2)將人胸水50μl與緩沖液200μl混合放入對照管中，混勻后置于37℃水浴反應60分鐘，再與1250μl顯色液混勻后，在生化分析儀中檢測405nm處的吸光度值，在生化分析儀中檢測405nm處的吸光度值，為A_對；

(3)將50μl標準品與200μl基質液混勻后，置于37℃水浴反應60分鐘，再與1250μl顯色液混勻后，在生化分析儀中檢測405nm處的吸光度值，為A_標；

(4)按下列公式得到人胸水a-L-巖藻糖苷酶的活性：胸水AFU活性(μmol/L·h)＝(A_測-A_對)/A_標×400；

所述基質液是濃度為400μmol/L的對硝基酚-a-L-巖藻糖苷；所述緩沖液是pH5.2的醋酸緩沖液；所述顯色液是pH?10.7的甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液；所述標準品是濃度為400μmol/L的對硝基酚。

其他實施例情況見表1；其中管號1、2分別是實施例1的測定管和對照管；管號3、4為一組分別對應測定管和對照管，為對另一標本的檢測；管號5、6為一組分別對應測定管和對照管，是對又一標本的檢測；空白管為蒸餾水與緩沖液的混合管。

表1.胸水AFU測定操作方法表：實驗過程中每份標本均做自身對照(單位μl，雙數管為對照管)

AFU活性采用比色法測定，所需試劑均購自Sigma公司；檢測儀器為BA-88半自動生化分析儀。