[發(fā)明專利]鼻咽癌易感基因無創(chuàng)檢測試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210053659.4
• 申請日: 2012-03-01
• 公開（公告）號(hào): CN102586446A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘加奎;姜麗
• 申請（專利權(quán)）人: 解碼(上海)生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)，具體涉及一種鼻咽癌易感基因檢測試劑盒，根據(jù)檢測結(jié)果從基因?qū)用嬖u估鼻咽癌發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別，并作為預(yù)防和治療鼻咽癌的方向指導(dǎo)。

背景技術(shù)

鼻咽癌是指發(fā)生于鼻咽腔頂部和側(cè)壁的惡性腫瘤。常見臨床癥狀是鼻塞、鼻涕流血、頭痛、耳鳴；晚期侵及顱腦，可出現(xiàn)耳鳴、耳聾、頭痛、復(fù)視及頸淋巴結(jié)腫大。在世界大多數(shù)國家，鼻咽癌發(fā)病率極低，但在中國南方部分省市和亞洲東南部一些國家其發(fā)病率卻很高，其中我國南方廣東省是世界最高發(fā)地區(qū)，世界人口標(biāo)化發(fā)病率高達(dá)男性約30/10萬，女性約13/10萬。研究結(jié)果表明，鼻咽癌具有顯著的地區(qū)差異、家族集聚現(xiàn)象和發(fā)病率相對穩(wěn)定等流行病學(xué)特征，移民流行病學(xué)研究證據(jù)和符合分離分析研究結(jié)果均提示遺傳因素在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。

細(xì)胞色素P450超家族是一類重要的代謝酶基因。其編碼的CYP450酶能將無活性的前致癌物代謝轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂谢钚缘闹虚g產(chǎn)物，這些中間產(chǎn)物具有親電子性而且可以與DNA共價(jià)結(jié)合形成加和物，從而損傷DNA及引起癌基因和抑癌基因的改變，導(dǎo)致癌變形成。CYP2E1酶主要代謝活化一些低分子量的化合物，包括亞硝胺類、黃曲霉素B1、苯并芘、四氯化碳等。

TNF是體內(nèi)具有多種生物活性的重要致炎細(xì)胞因子，主要由脂多糖激活的單核、巨噬細(xì)胞及淋巴細(xì)胞等分泌。TNF有抗病毒、廣泛的誘導(dǎo)炎癥和免疫調(diào)節(jié)功能，最突出的是其強(qiáng)大的抗腫瘤特性。從而在自身免疫性疾病、感染性疾病，特別是在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。研究表明TNF-βG252A單核苷酸位點(diǎn)多態(tài)性與鼻咽癌易感性密切相關(guān)，因此可以作為鼻咽癌易感性的危險(xiǎn)因素之一。

谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GSTs)是人體內(nèi)一類具有重要解毒作用的多基因酶族，其中的GSTM1和GSTT1分別編碼GST-μ和GST-θ同功酶，分別對多環(huán)芳烴類和環(huán)氧化物及殺蟲劑中的鹵代烷烴類有很強(qiáng)的解毒作用。研究表明GSTT1和GSTM1基因的缺失導(dǎo)致它們編碼的同功酶缺失，均可能影響機(jī)體對上述毒物的解毒功能，增加宿主對該類致癌物作用的敏感性。有研究表明GSTM1和GSTT1存在人群缺失多態(tài)，且地域不同缺失率有差異，中國人GSTM1缺失率偏高，在35％-63％，尤其GSTT1缺失率高達(dá)58％，這部分人群相當(dāng)于增加了環(huán)境毒素和致癌物質(zhì)的濃度，提高了個(gè)體罹患一系列類型癌癥的風(fēng)險(xiǎn)。國內(nèi)外研究表明，攜帶GSTM1和GSTT1缺失型的個(gè)體，鼻咽癌的風(fēng)險(xiǎn)增加，因此GSTM1/GSTT1缺失型是中國人群重要的鼻咽癌遺傳易感因素之一。

綜上所述，鑒于CYP2E1基因上Rsal1多態(tài)性，TNF-β基因上G252A位點(diǎn)多態(tài)性，GSTM1基因缺失與否(Present/Null)，GSTT1基因缺失與否(Present/Null)在鼻咽癌變過程中有著不可忽視的作用，可以將上述基因作為遺傳易感因素來檢測出受檢者在鼻咽癌發(fā)生相關(guān)的基因單核苷酸位點(diǎn)基因型，及時(shí)篩查出易患鼻咽癌的高危人群，從而有針對性的預(yù)防和治療鼻咽癌，這對于降低鼻咽癌的發(fā)病率有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

基于CYP2E1基因上Rsal1多態(tài)性，TNF-β基因上G252A位點(diǎn)多態(tài)性，GSTM1基因缺失與否(Present/Null)，GSTT1基因缺失與否(Present/Null)的4個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)基因型可作為評估鼻咽癌發(fā)病的危險(xiǎn)因子的基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供一種鼻咽癌易感基因檢測試劑盒。

該試劑盒包括：

檢測CYP2E1基因上Rsal1多態(tài)性，TNF-β基因上G252A位點(diǎn)多態(tài)性，GSTM1基因缺失與否(Present/Null)，GSTT1基因缺失與否(Present/Null)的4個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)基因型的特異性引物對及DNA測序引物；

PCR反應(yīng)組件(包括Taq酶、dNTP混合液、反應(yīng)緩沖液、ddH2O等)；

PCR產(chǎn)物純化組件(包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等)；

DNA測序反應(yīng)組件(包括BigDye?mix，EDTA溶液、100％乙醇溶液、70％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等)。

本發(fā)明試劑盒的組分和含量包括：

PCR反應(yīng)體系：10×PCR反應(yīng)緩沖液2.5ul；25mM?dNTP混合液0.2ul；5U/ul?Taq?DNA聚合酶0.125ul；20uM特異性引物對(每條引物各0.25ul)；ddH2O19.175ul。