[發(fā)明專利]脊索瘤細(xì)胞株及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210052961.8
• 申請(qǐng)日: 2012-03-02
• 公開（公告）號(hào): CN102618499A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 萬虹;張俊廷;馮潔;歷俊華;吳震;王亮;孫異臨;郝淑煜;李德志
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京市神經(jīng)外科研究所
• 主分類號(hào): C12N5/09
• 分類號(hào): C12N5/09;C12Q1/02;A01K67/027
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 李超

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及脊索瘤細(xì)胞株及其用途，屬于腫瘤生物學(xué)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種人腦脊索瘤細(xì)胞系(BHC2)的建立及其用途。

背景技術(shù)

脊索瘤來源于脊索胚胎殘余組織產(chǎn)生的原發(fā)性骨性腫瘤，是一種少見的慢性進(jìn)展的惡性腫瘤，占全部原發(fā)惡性腫瘤的3％～4％，居原發(fā)性惡性骨腫瘤第4位。有約1/3起源于顱底部，其余可起源于脊柱、骶尾部或中線以外的位置。該腫瘤發(fā)展緩慢且具有惡性腫瘤的生長方式，常生長于斜坡骨質(zhì)，部位深在，且常呈廣泛性生長，部分還有分隔，并毗鄰重要的血管和神經(jīng)，徹底切除非常困難，而且該腫瘤對(duì)放、化療不敏感，因此顱底脊索瘤治療極其困難，復(fù)發(fā)率高且預(yù)后相對(duì)較差，中位生存期約為6年，10年生存率僅為40％，大約50-70％的患者無治而終，對(duì)患者及其家庭乃至社會(huì)都造成一定程度的危害。因此，開發(fā)更為有效的腫瘤治療方案和治療藥物是非常重要的。

脊索瘤從組織形態(tài)學(xué)將其分為普通型脊索瘤、軟骨樣脊索瘤和低分化型脊索瘤。光鏡下呈條索狀排列的空泡細(xì)胞。脊索瘤的確診依賴免疫組織化學(xué)染色。目前常用的標(biāo)志蛋白有S-100、上皮細(xì)胞膜抗原(Epithelial?Membrane?Antigen，EMA)、細(xì)胞角蛋白(Cytokeratin，CK)以及vmientin蛋白。Vujovic等人對(duì)胚胎脊索組織、53例脊索瘤及其它323例腫瘤組織(包括163例軟骨腫瘤)進(jìn)行了Brachyury蛋白的免疫組化研究，發(fā)現(xiàn)胚胎脊索組織和所有脊索瘤細(xì)胞均Brachyury蛋白(+)，而所有其它腫瘤及正常組織均為(-)。這個(gè)研究表明脊索瘤組織中的軟骨樣細(xì)胞和脊索樣細(xì)胞都是來源于脊索細(xì)胞，所以Brachyury蛋白可作為鑒別脊索組織及脊索組織來源的腫瘤特異性標(biāo)志物。Schwab等人比較了6例經(jīng)典脊索瘤和14例原發(fā)脊索肉瘤，發(fā)現(xiàn)Brachury和CD24只在脊索瘤中表達(dá)。Brachury是新近發(fā)現(xiàn)的一種脊索瘤相關(guān)分子標(biāo)志物，其它的生物標(biāo)志蛋白還有癌胚抗原(Carcino?Embryonic?Antigen，CEA)、半乳糖苷酶結(jié)合蛋白(Galenctin-3)、Fascin-1、生長因子類(Growth?factors，GFs)、基質(zhì)金屬蛋白酶類(Matrix?Metalloproteinase，MMPs)等。

脊索瘤細(xì)胞系是研究腫瘤生物學(xué)特性的重要工具，并且是研究抗腫瘤藥物的有用工具。將來的治療策略應(yīng)該是靶向清除脊索瘤細(xì)胞，從而獲得對(duì)腫瘤的有效治療。開發(fā)靶向藥物首先需要一個(gè)性質(zhì)穩(wěn)定的脊索瘤細(xì)胞系，以此脊索瘤細(xì)胞系為基礎(chǔ)才可能研發(fā)出特異性靶向脊索瘤的藥物，但目前這種細(xì)胞系國內(nèi)尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的第一個(gè)技術(shù)問題是提供一株能夠在體外長期傳代培養(yǎng)的、性質(zhì)穩(wěn)定的脊索瘤細(xì)胞系(BHC2)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

人腦脊索瘤細(xì)胞系(BHC2)，其特征在于：所述細(xì)胞系在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏號(hào)為CGMCC?NO：5321。

所述的人脊索瘤細(xì)胞系，生物學(xué)特性為：細(xì)胞呈長梭型，貼壁生長，胞漿存在大量空泡。

所述的人脊索瘤細(xì)胞系，有Brachyury、S100、Galectin-3、Fascin-1多種脊索來源細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白的表達(dá)。

所述細(xì)胞系的染色體為異倍體核型。

所述的人脊索瘤細(xì)胞系，該細(xì)胞周期各時(shí)相的細(xì)胞百分率分別G1期51.3％、S期23.6％、G2-M期25％、G2/G1≈2，表現(xiàn)出腫瘤細(xì)胞增殖特性。

本發(fā)明提供一種人脊索瘤細(xì)胞系，該人脊索瘤細(xì)胞系HBC2已于2011年9月29日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(其簡稱為CGMCC)，其保藏編號(hào)為CGMCC?No.5321，建議的分類名為：人脊索瘤細(xì)胞。保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼100101。

本發(fā)明所述的人腦脊索瘤細(xì)胞系HBC2是發(fā)明人從顱底腦脊索瘤患者的腫瘤組織中分離培養(yǎng)獲得，該細(xì)胞通過細(xì)胞因子依賴法和反復(fù)貼壁法篩選純化后獲得增殖能力很強(qiáng)的HBC2細(xì)胞，在體外經(jīng)過超過14次的傳代培養(yǎng)，細(xì)胞仍保持脊索腫瘤特性。該細(xì)胞具有脊索細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，并表達(dá)多種脊索來源組織的標(biāo)志蛋白，同時(shí)也具有腫瘤特性和成瘤能力。

通過光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡方法證實(shí)，本發(fā)明所述的人脊索瘤細(xì)胞系在胞漿中存在特征性空泡結(jié)構(gòu)。

通過免疫組織化學(xué)方法證實(shí)，本發(fā)明所述的人脊索瘤細(xì)胞系表達(dá)多種脊索來源組織的標(biāo)志蛋白Brachyury、S100、Galectin-3、Fascin-1。