[發明專利]一種DF1細胞培養外源性禽白血病病毒的快速檢測方法

無效

• 申請號: 201210052211.0
• 申請日: 2012-03-02
• 公開（公告）號: CN102590507A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 孫淑紅;張培培;劉紹瓊;王秀臻
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種DF1細胞培養外源性禽白血病病毒的快速檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

1）DF1細胞的培養

DF1細胞傳代于24孔細胞培養板，并置于39℃、5%CO₂培養箱中進行培養，培養至DF1細胞長成70%-80%單層；培養基為含10%胎牛血清的高糖細胞培養基DMEM；

2）?雞抗凝血的采集與處理

常規方法無菌采集雞抗凝血1ml，1500rpm離心5min取白細胞，接種到步驟１培養至長成70%-80%單層的DF1細胞；再向24孔細胞培養板中每孔中加入100μl待檢樣品，置于39℃、5%CO₂培養箱中繼續培養2?h，然后換成含1%胎牛血清的高糖細胞培養基DMEM，再置于39℃、5%CO₂培養箱中培養；

3）DF1細胞的收集

培養4d-5d后倒掉上述細胞培養基，?24孔細胞培養板中每孔加入500μl?pH?7.2的磷酸鹽緩沖液PBS：NaCl?137mmol/L，KCl?2.7mmol/L，Na₂HPO_4?10mmol/L，?KH₂PO₄?2mmol/L，-20℃凍存至少1h；

4）DF1細胞中p27抗原的檢測

取出上述凍存的DF1細胞，融化后以3000rpm離心5min后取上層液體，吸取100μl上層液體加到p27抗原反應板中，按ELISA試劑盒說明書檢測DF1細胞中的p27抗原，并通過酶標儀讀數進行結果判定；當樣品與陽性對照比值S/P值大于0.2時，即判定該樣品陽性。