[發(fā)明專利]一種CTLA4融合蛋白及其制備方法和用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210051291.8
• 申請日: 2012-03-01
• 公開（公告）號: CN102618565A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 盧曉風(fēng);朱升云;劉珊;萬琳;楊浩;程驚秋
• 申請（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)華西醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/63;C12N15/81;C12N1/19;C07K19/00;C12P21/02;A61K38/17;A61K47/48;A61P37/06;C12R1/84
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;全學(xué)榮

1.一種基因，其特征在于：所述基因是核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示的DNA分子。

2.一種重組載體，其特征在于：包含權(quán)利要求1所述的基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組載體，其特征在于：所述的重組載體是重組pPIC?9K質(zhì)粒。

4.一種重組菌，其特征在于：它包含權(quán)利要求2或者3所述的重組載體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組菌，其特征在于：所述的重組菌為重組畢赤酵母。

6.一種蛋白質(zhì)，其特征在于：它由權(quán)利要求1所述的基因編碼。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的蛋白質(zhì)，其特征在于：所述蛋白質(zhì)的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

8.一種制備權(quán)利要求6或者7所述蛋白質(zhì)的方法，其特征在于：包含如下步驟：

i、取權(quán)利要求4或者5所述的重組菌，接種到BMGY培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基的pH為6.0，28℃，280rpm培養(yǎng)至其對數(shù)生長期，其OD₆₀₀＝2～6；

ii、收集菌體，將其培養(yǎng)在BMMY培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度28℃，轉(zhuǎn)速250rpm，進行誘導(dǎo)表達(dá)，誘導(dǎo)劑為甲醇，誘導(dǎo)起始重組菌密度為40～80AU/ml，培養(yǎng)pH：6.0～8.0；誘導(dǎo)劑濃度：0.5％～5.0％(v/v)；誘導(dǎo)時間：24～96h；

iii、收集培養(yǎng)物上清，分離純化，即得到目的蛋白。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：所述步驟ii誘導(dǎo)表達(dá)的參數(shù)為：誘導(dǎo)起始的重組菌密度：60～80AU/ml；培養(yǎng)pH：6.0；誘導(dǎo)劑濃度：3％；誘導(dǎo)時間：72h～96h。

10.權(quán)利要求6或者7所述的蛋白質(zhì)在制備CD28分子拮抗劑中的用途。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其特征在于：所述蛋白質(zhì)在制備拮抗CD28分子與B7分子相互作用的拮抗劑中的用途。

12.權(quán)利要求6或者7所述的蛋白質(zhì)在制備免疫抑制劑中的用途。

13.一種CD28分子拮抗劑，其特征在于：其有效成分為權(quán)利要求6或者7所述的蛋白質(zhì)。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的拮抗劑，其特征在于：所述的拮抗劑為拮抗CD28分子與B7分子相互作用的拮抗劑。

15.一種免疫抑制劑，其特征在于：其有效成分為權(quán)利要求6或者7所述的蛋白質(zhì)。