[發(fā)明專利]用于制備神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)基及其用途有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210051095.0 | 申請日： | 2012-02-29 |
| 公開（公告）號： | CN102604894A | 公開（公告）日： | 2012-07-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 潘光錦;裴端卿;王麗輝;王淋立;薛燕婷 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院 |
| 主分類號： | C12N5/0797 | 分類號： | C12N5/0797;C12N5/10;C12N5/079;C12N5/0793;C12M1/00;C12Q1/02;A61K35/30;A61P25/00;A61P25/28 |
| 代理公司： | 北京清亦華知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 李志東 |
| 地址： | 510530 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 制備 神經(jīng) 干細(xì)胞 培養(yǎng)基 及其 用途 | ||
1.一種用于制備神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)基，其特征在于，包含：
基礎(chǔ)培養(yǎng)基，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基適于干細(xì)胞生成；以及
細(xì)胞信號通路抑制劑，所述細(xì)胞信號通路抑制劑為選自GSK抑制劑、MEK抑制劑、TGF-β抑制劑、ROCK抑制劑和BMP抑制劑的至少一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為mTeSR1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述細(xì)胞信號通路抑制劑為GSK抑制劑CHIR99021、MEK抑制劑PD0325901、TGF-β抑制劑A83-01、ROCK抑制劑thiazovivin和BMP抑制劑DMH1的組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)基，其特征在于，按照重量百分比，所述培養(yǎng)基含有：
濃度為0.3μM-30μM的GSK抑制劑CHIR99021；
濃度為10nM-10μM的MEK抑制劑PD0325901；
濃度為50nm-5μM的TGF-β抑制劑A83-01；
濃度為50nm-5μM的ROCK抑制劑thiazovivin；以及
濃度為20nm-2μM的BMP抑制劑DMH1。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)基，其特征在于，按照重量百分比，所述培養(yǎng)基含有：
濃度為3μM的GSK抑制劑CHIR99021；
濃度為1μM的MEK抑制劑PD0325901；
濃度為0.5μM的TGF-β抑制劑A83-01；
濃度為0.5μM的ROCK抑制劑thiazovivin；以及
濃度為0.2μM的BMP抑制劑DMH1。
6.一種用于制備神經(jīng)干細(xì)胞的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有細(xì)胞信號通路抑制劑，所述細(xì)胞信號通路抑制劑為選自GSK抑制劑、MEK抑制劑、TGF-β抑制劑、ROCK抑制劑和BMP抑制劑的至少一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備神經(jīng)干細(xì)胞的試劑盒，其特征在于，所述細(xì)胞信號通路抑制劑為GSK抑制劑CHIR99021、MEK抑制劑PD0325901、TGF-β抑制劑A83-01、ROCK抑制劑thiazovivin和BMP抑制劑DMH1的組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備神經(jīng)干細(xì)胞的試劑盒，其特征在于，所述GSK抑制劑CHIR99021、MEK抑制劑PD0325901、TGF-β抑制劑A83-01、ROCK抑制劑thiazovivin和BMP抑制劑DMH1分別設(shè)置在不同的容器中。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備神經(jīng)干細(xì)胞的試劑盒，其特征在于，進(jìn)一步包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為mTeSR1。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備神經(jīng)干細(xì)胞的試劑盒，其特征在于，所述細(xì)胞信號通路抑制劑溶解于所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的制備神經(jīng)干細(xì)胞的試劑盒，其特征在于，按照重量百分比，所述細(xì)胞信號通路抑制劑為：濃度為3μM的GSK抑制劑CHIR99021、濃度為1μM的MEK抑制劑PD0325901、濃度為0.5μM的TGF-β抑制劑A83-01、濃度為0.5μM的ROCK抑制劑thiazovivin以及濃度為0.2μM的BMP抑制劑DMH1的組合。
12.一種用于制備神經(jīng)干細(xì)胞的試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任一項所述的培養(yǎng)基。
13.權(quán)利要求6-12任一項所述的試劑盒在制備神經(jīng)干細(xì)胞中的用途。
14.權(quán)利要求1-5任一項所述的培養(yǎng)基在制備神經(jīng)干細(xì)胞中的用途。
15.一種制備神經(jīng)干細(xì)胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：
利用權(quán)利要求1-5任一項所述的培養(yǎng)基，培養(yǎng)體細(xì)胞，所述體細(xì)胞攜帶編碼選自O(shè)ct4、Sox2、Klf4以及miR302的至少一種多功能干細(xì)胞因子的核酸序列，以便誘導(dǎo)所述體細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)干細(xì)胞。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述體細(xì)胞為人尿液脫落細(xì)胞。
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