[發(fā)明專利]呋喃妥因殘留標示物氨基乙內(nèi)酰脲的單克隆抗體及制備方法和應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210049810.7
• 申請日: 2012-02-29
• 公開（公告）號: CN103288961A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發(fā)明（設計）人: 袁宗輝;柳璇;彭大鵬;王玉蓮;陳冬梅;陶燕飛;黃玲利;戴夢紅;劉振利
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/543;C12R1/91
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種呋喃妥因殘留標示物氨基乙內(nèi)酰脲的單克隆抗體，其特征在于，雜交瘤細胞AHD/3D4，CCTCC?NO：C201151。

2.權(quán)利要求1所述的一種呋喃妥因殘留標示物氨基乙內(nèi)酰脲的單克隆抗體的制備方法，其步驟是：

A、將半抗原CPAHD與牛血清白蛋白偶聯(lián)得到免疫原；

B、將半抗原CPAHD與卵清蛋白偶聯(lián)得到包被原；

C、利用步驟A的免疫原制備得到保藏號為CCTCC?NO：C201151雜交瘤細胞AHD/3D4所分泌的單克隆抗體；

D、用步驟B的包被原包被固相載體；

E、將待測樣品用酸處理，加入苯甲醛超聲衍生后，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯層氮氣吹干、正己烷凈化和樣品稀釋液重新溶解得到待測物；

F、對步驟E的待測物進行酶聯(lián)免疫檢測；

所述的步驟E樣品稀釋液的組分及配比為：NaCl?8.0g，KH₂PO₄?0.2g，Na₂HPO4·12H₂O?2.9g，KCl?0.2g，加雙蒸水定容至1000mL。

3.權(quán)利要求1所述的一種呋喃妥因殘留標示物氨基乙內(nèi)酰脲的單克隆抗體的試劑盒，其特征在于：它含有如下組份：

(1)包被有包被原CPAHD-OVA的酶標板；

(2)CPAHD標準品溶液6瓶，濃度分別為0、1、2、4、8、16μg/L；

(3)AHD/3D4細胞株單克隆抗體工作液；

(4)辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG抗體工作液；

(5)濃縮磷酸鹽緩沖液：NaCl?80.0g，KH₂PO₄?2.0g，Na₂HPO₄·12H₂O?29.0g，KCl?2.0g，加雙蒸水至1000mL；

(6)濃縮洗滌液：NaCl?80.0g，KH₂PO₄?2.0g，Na₂HPO₄·12H₂O?29.0g，KCl?2.0g，Tween-20?5mL，加雙蒸水至1000mL；

(7)底物混合液：準確吸取底物B液10mL，加入100μL底物A液，混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用；

(9)終止液：2mol/L硫酸溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種呋喃妥因殘留標示物氨基乙內(nèi)酰脲的單克隆抗體的試劑盒，其特征在于：所述的酶標板的制備方法，其步驟是：

(1)包被：用碳酸鹽緩沖液將CPAHD-OVA稀釋成0.1μg/mL包被原溶液，吸取100μL包被原溶液于各酶標孔，水平放置于濕盒，4℃孵育12h；

(2)洗板：甩出酶標板內(nèi)包被原溶液，拍干，準確吸取250μL洗滌液于各酶標孔，靜置30秒后，甩出洗滌液，在吸水紙上拍干；重復洗滌3次；

(3)封閉：準確吸取250μL封閉液于各酶標孔，水平置于濕盒內(nèi)，37℃培養(yǎng)箱孵育2h；

(4)洗板：甩出封閉液，準確吸取250μL洗滌液于各酶標孔，靜置30秒后，甩出洗滌液，在吸水紙上拍干；重復洗滌3次；

(5)烘干：在吸水紙上拍干后；將酶標板于37℃培養(yǎng)箱中倒置烘干0.5h；

(6)封裝：酶標板烘干后和干燥劑一起裝入鋁箔袋，用真空封裝機封裝；

所述的干燥劑為硅膠或無水氯化鈣其中的一種。

5.權(quán)利要求3所述的一種呋喃妥因殘留標示物氨基乙內(nèi)酰脲的單克隆抗體的試劑盒在動物可食性組織中呋喃妥因殘留檢測中的應用。