[發(fā)明專利]一種誘導(dǎo)鐵皮石斛試管開花的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210049254.3
• 申請日: 2012-02-29
• 公開（公告）號: CN102577963A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉狄;賴鐘雄;陳發(fā)興;林玉玲;劉生財;吳高杰
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種鐵皮石斛試管開花方法，屬于農(nóng)業(yè)植物生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

鐵皮石斛（Dendrobium??officinale??Kimura?et?Migo）又稱黑節(jié)草，屬氣生蘭科草本植物。鐵皮石斛是石斛中的極品，因其表皮呈鐵綠色而得名，是著名的觀賞兼藥用蘭花。因其對生境條件要求苛刻，難開花，在栽培條件下，從種子萌發(fā)到開花通常需要3～4年^[1]。而應(yīng)用植物生物技術(shù)誘導(dǎo)鐵皮石斛開花，具有操作簡單、生長條件可控，重復(fù)性強，周期短的特點，并可為研究植物開花機理和生理研究，提供了更精準(zhǔn)的研究手段和良好的實驗系統(tǒng)。因此，鐵皮石斛試管花的誘導(dǎo)對提高植物開花機理研究具有非常重要的意義。

植物生長調(diào)節(jié)劑中，細胞分裂素既能促進花芽分化，又可促進營養(yǎng)芽分化，所以研究中通常應(yīng)考慮使用不同種類和濃度的細胞分裂素。鄭立明^[2]、朱國兵^[3]等人對蘭花試管開花研究表明，6-BA可以誘導(dǎo)花芽形成，但是易產(chǎn)生畸形花。石斛屬植物開花過程中內(nèi)源激素變化，以及植物生長調(diào)節(jié)劑如GA,BA等對開花的誘導(dǎo)與調(diào)控等等亦有一些研究^?[4-13]。目前對于在對鐵皮石斛試管開花的研究報道中，多采用6-BA、NAA等不同濃度激素，或添加一定量的?PP_333?、TDZ?等進行誘導(dǎo)，雖可獲得一定的開花誘導(dǎo)率^{?[１，１４，15]}，但是植株生長較弱，葉片卷曲，花朵較小，且常出現(xiàn)花器官不完整的花朵。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種鐵皮石斛試管開花的方法，誘導(dǎo)鐵皮石斛開花，從而提高鐵皮石斛成花率。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

本發(fā)明提供的一種鐵皮石斛試管開花的方法，包括以下步驟：

（1）壯苗培養(yǎng)階段：采用鐵皮石斛莖段離體培養(yǎng)的原球莖為試驗材料，以1/2?MS為基本培養(yǎng)基，蔗糖3%,添加NAA0.5-1.0?mg/L?和?6-BA?1.5-2.5?mg/L，采用LED光源，在光照強度35－55μmol.m^-2.s^-1，波長600～690?nm，光照時間12?-16?h/d，培養(yǎng)溫度25±2℃的條件下進行壯苗培養(yǎng)?50-80?d；

（2）誘導(dǎo)開花階段I：培養(yǎng)基I為：1/2?MS基本培養(yǎng)基+PP_333?0.50－1.50?mg/L+ABA?0.5-1.0?mg/L，另在培養(yǎng)基I中附加體積比為10%-20%的香蕉汁、0.1%-0.5%活性炭,?采用LED光源，在光照強度50－75μmol.m^-2.s^-1，波長600～690?nm，培養(yǎng)溫度26±2℃的條件下，培養(yǎng)20-30?d；

（3）誘導(dǎo)開花階段II：誘導(dǎo)開花階段I完成后，進入誘導(dǎo)開花階段II，培養(yǎng)基II為：?1/2?MS基本培養(yǎng)基+TDZ?0.05-1.00?mg/L?+?6-BA?0.5-1.0?mg/L,?另在培養(yǎng)基II中附加體積比為10%-20%的香蕉汁、0.1%-0.5%活性炭，采用LED光源，在光照強度50－75μmol.m^-2.s^-1，波長490～590?nm，培養(yǎng)溫度15±2℃的條件下，培養(yǎng)20-30d，進入誘導(dǎo)開花階段I；

所述1/2?MS基本培養(yǎng)基，指的是大量元素減半，其余含量不變；

????通過上述（2）與（3）即：誘導(dǎo)開花階段I--誘導(dǎo)開花階段II--誘導(dǎo)開花階段I的交替培養(yǎng)誘導(dǎo)后，進入開花培養(yǎng)階段；

（4）開花培養(yǎng)階段：以MS為基本培養(yǎng)基，添加6-BA?0.5-1.5?mg/L和馬鈴薯100-200?g/L，采用LED光源，在光照強度65－85μmol.m^-2.s^-1，光照時間12?-16?h/d，波長600～690?nm，培養(yǎng)溫度26±2℃的條件下進行開花培養(yǎng)。

本發(fā)明的誘導(dǎo)鐵皮石斛開花的方法，可以準(zhǔn)確有效地誘導(dǎo)鐵皮石斛花芽的形成，以及調(diào)控鐵皮石斛試管開花率；在鐵皮石斛花芽形成的最關(guān)鍵階段，通過溫度刺激、以及PP₃₃₃，ABA，TDZ?和BA的共同協(xié)同調(diào)節(jié)作用，顯著激活鐵皮石斛試管苗開花的關(guān)鍵因子，從而提高鐵皮石斛成花率。本發(fā)明的方法可誘導(dǎo)健壯植株，花型大，其開花誘導(dǎo)率為90.5%-96.7%，花器官完整的花朵高達98.5%－100%。