[發明專利]接種生物濾池去除水中MIB和Geosmin的方法

無效

• 申請號: 201210048588.9
• 申請日: 2012-02-28
• 公開（公告）號: CN102745820A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 周北海;袁蓉芳;于麗瑩
• 申請（專利權）人: 北京科技大學
• 主分類號: C02F3/34
• 分類號: C02F3/34;C02F101/34
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 皋吉甫

1.接生物濾池去除水中MIB和Geosmin的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

步驟1：

1）配制無機鹽培養基：將0.8-1.2g?的NH₄NO₃、0.8-1.2g?的KH₂PO₄、?0.4-0.6g?的MgSO₄?7H₂O和0.2g?的KCl溶于1000mL的蒸餾水中，調節pH值至7.2-7.4，在溫度為121°C下滅菌30min，用水系針式過濾器，在無菌環境下將1-100μL的濃度為?20μg/L的?MIB和Geosmin標準溶液分別加入無菌的200mL無機鹽培養基中，得到濃度分別為100ng/L，200ng/L、500ng/L、1μg/L、2μg/L、5μg/L和10μg/L的?MIB和Geosmin的無機鹽培養基，備用；

2）配制LB固體培養基：將5-10g的蛋白胨、3-5g的酵母提取物和8-10g的?NaCl溶于1000mL的蒸餾水中，用濃度為1mol/L的NaOH調節pH值到7.2-7.4，然后加入10-15g瓊脂粉，加熱使瓊脂粉溶解，然后冷卻到室溫，備用；

3）配制緩沖液：將Na₂HPO₄?12H₂O溶于蒸餾水中配制得到濃度為0.2?mol/L?的Na₂HPO₄，將NaH₂PO₄?2H₂O溶于蒸餾水中配置得到濃度為0.2?mol/L?NaH₂PO₄；將制備得到NaH₂PO₄?、Na₂HPO₄和水按照19:81:200的體積比混合后，在溫度為121°C下滅菌30min，得到濃度為0.1mol/L、pH=7.4的?PBS緩沖液，儲存于冷暗處，備用；

步驟2：?

1）取到30mL上述步驟制備得到的PBS緩沖液，加入一定量的活性炭濾池中生物膜生長成熟的活性炭，劇烈震蕩10?min，靜置一段時間，滅菌，得到生物膜的PBS緩沖液，用吸管吸取10mL含生物膜的PBS緩沖液溶于200mL?的步驟1.1得到濃度為100ng/L的?MIB和Geosmin的無機鹽培養基中進行選擇性培養富集，置于恒溫振蕩培養箱在溫度為30°C，轉速為160rpm的條件下培養，待培養基混濁后，分別按照10%的接種量逐步轉接到步驟1.1得到的200ng/L、500ng/L、1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L的?MIB和Geosmin的無機鹽培養基中，在每個液體培養階段結束后，以無菌操作方法吸取1mL充分混勻的水樣，注入盛有9mL已滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1:10稀釋液；吸取1:10的稀釋液1mL注人盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1:100稀釋液，按同法依次稀釋成1:10³，1:10⁴，1:10⁵，1:10⁶，1:10⁷的稀釋液，備用；用滅菌吸管取不同稀釋度的稀釋液0.2mL，分別注入含有已凝固固體培養基的平皿內，用玻璃刮棒將菌懸液在培養基表面涂布均勻，使用前，玻璃刮棒需經無菌處理，用后立即在酒精燈上灼燒滅菌、放置冷卻，交替使用，每次檢驗時做一平行接種，同時另用一個平皿只傾注LB固體培養基作為空白對照，待菌液吸收后，翻轉平皿，使底面向上，置于30°C±1°C培養箱內培養48h；采用平板劃線法分離純化降解菌種，得到微球菌、黃桿菌、短桿菌和假單胞菌為MIB降解菌，金色單胞菌、中華根瘤菌和寡養單胞菌為Geosmin降解菌；

步驟3：?

將清洗后的砂粒填入高度為100-550mm的過濾柱，將含有MIB降解菌和Geosmin降解菌的濃度為1×10³個/mL的菌液,在空床停留時間6-60min，流過過濾柱并循環4天，使MIB降解菌和Geosmin降解菌附著在所述濾料表面，從而去除水中MIB和Geosmin。