[發明專利]一種用于觀察水稻葉鞘組織胼胝質的葉鞘組織制片方法

無效

• 申請號: 201210048297.X
• 申請日: 2012-02-29
• 公開（公告）號: CN102620960A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 陳建明;楊麗;張玨鋒;何月平
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30;G01N1/42
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所 33213
• 代理人: 吳秉中

1.一種用于觀察水稻葉鞘組織胼胝質的葉鞘組織制片方法，其特征在于包括以下工藝步驟：

1）材料前處理：取分蘗期的水稻葉鞘組織，洗凈擦干后迅速用刀片切成0.3～0.5?cm的小段，然后立即放入10%的甘油溶液中，并用真空泵抽氣10～20?min，直至葉鞘組織下沉為止；

2）樣品固定：在冷臺底座先加1滴組織冷凍膠，再將步驟1）得到的葉鞘組織小段垂直置于平放的冷臺上，再加2～5滴組織冷凍膠將葉鞘組織小段完全包裹住，并放在冷凍切片機中的樣品臺上，放置100～140?min后，即可用于冷凍切片；

3）冷凍切片：將粘有葉鞘組織的冷臺固定在冷凍切片機的冷臺固定槽上，擰緊固定螺絲，并將切片厚度調節旋鈕調至切片厚度10μm，箱體最低控制溫度為-40℃，切片頭最低控制溫度為-50℃，搖動旋轉手輪進行切片；

4）展片：先將載玻片靠近切片刀，每切一張切片，用毛筆輕輕地將切片移到載玻片上，每塊載玻片貼上15～20張切片；

5）染色：貼好切片后，在室溫下讓冷凍膠稍稍干燥，放入96%酒精浸泡6～10小時后，取出并將酒精晾干，再加入1?ml濃度為1/15?mol/L、pH值為7.0的磷酸緩沖液于切片上，45?min后再加1ml濃度為0.1?mol、pH值為7.0的苯胺藍染色液，染色60?min后將載玻片緩慢傾斜倒掉染色液；

6）顯微觀察與拍照：待切片剛剛干燥時，立即在Olympus?BX51熒光正置顯微鏡下用紫外光激發觀察到葉鞘組織中的胼胝質，并用該顯微鏡專用的照相機進行拍照。

2.如權利要求1所述的一種用于觀察水稻葉鞘組織胼胝質的葉鞘組織制片方法，其特征在于所述的步驟1）中真空泵為SHZ-CA型循環水式多用真空泵。

3.如權利要求1所述的一種用于觀察水稻葉鞘組織胼胝質的葉鞘組織制片方法，其特征在于所述的步驟2）中葉鞘組織小段垂直置于平放的冷臺前，先用擦鏡紙將其表面上的殘余液體吸干。

4.如權利要求1所述的一種用于觀察水稻葉鞘組織胼胝質的葉鞘組織制片方法，其特征在于所述的步驟3）中冷凍切片時如冷刀上的霜層較厚，應及時啟動除霜程序以除去切片刀上的霜層以防卷片。