[發明專利]一種腸道病毒檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201210047942.6
• 申請日: 2012-02-28
• 公開（公告）號: CN102534051A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 陳瑜;李蘭娟;崔大偉;謝國良
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

1.一種腸道病毒檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含：定量RT-PCR反應液、酶混合液、引物探針混合液、CoxB1標準品、CoxB2標準品、CoxB3標準品、腸道病毒標準品、CoxB1陽性對照品、CoxB2陽性對照品、CoxB3陽性對照品、腸道病毒陽性對照品、陰性對照品，盒體(7)設有容器孔，分別放置定量RT-PCR反應液管(1)、酶混合液管(2)、引物探針混合液管(3)、陰性對照品管(4)、標準品管(5)、陽性對照品管(6)，標準品管(5)有4管，分別放置CoxB1標準品、CoxB2標準品、CoxB3標準品、腸道病毒標準品，陽性對照品管(6)有4管，分別放置CoxB1陽性對照品、CoxB2陽性對照品、CoxB3陽性對照品、腸道病毒陽性對照品；

其中定量RT-PCR反應液含有PCR反應緩沖液、氯化鎂和三磷酸脫氧核糖核苷酸混合物，酶混合液含耐熱Taq?DNA聚合酶、RNA酶抑制劑和MMLV逆轉錄酶，引物探針混合液含四種病毒的特異性引物和相應的四種不同熒光標記的探針，引物探針混合液管需為棕色管，陰性對照為高溫高壓滅菌的焦碳酸二乙酯處理水，陽性對照為CoxB1、CoxB2、CoxB3及腸道病毒的陽性質粒樣品；

檢測用上游引物和下游引物以及相應的特異性探針序列為：

上游引物CoxB1-F：5’-CACTCACGGTCCGAATCRTCCA-3’

下游引物CoxB1-R：5’-TTTYTGAGTTRTTRGTGTATGTGGCAT-3’

特異性探針CoxB1-P：5’-FAM-TTCCTGTGCCGGTCTGCCTGTGT-BHQ1-3’

上游引物CoxB2-F：5’-GATCAGCATGTGTGTTTTACACGA-3’

下游引物CoxB2-R：5’-GCCTGTCTAACACTCACCTTCCA-3’

特異性探針CoxB2-P：5’-CY5-TACACCAACAGCAAAAATGCAGCCAA-BHQ2-3’

上游引物CoxB3-F：5’-CCAGTAMCAGATAAAGTGGATTCRTA-3’

下游引物CoxB3-R：5-AGGAARGGTATRGACATGCGTG-3’

特異性探針CoxB3-P：5’-HEX-CCAAGTGTGTTCTGGACAGAGGGTAATGC-BHQ1-3’

上游引物腸道病毒-F：5’-CCCTGAATGCGGCTAATCC-3’

下游引物腸道病毒-R：5’-ATTGTCACCATAAGCAGCCA-3’

特異性探針腸道病毒-P：5’-ROX-AACCGACTACTTTGGGTGTCCGTGTTTC-BHQ2-3’

CoxB1標準品序列為：

ACGTGAAAAA????CTACCACTCA????CGGTCCGAAT????CGTCCATTGA????AAATTTCCTG

TGCCGGTCTG????CCTGTGTATA????CTATGCCACA????TACACCAATA????ACTCAGAAAA

GGGGTTTGCA????GAGTGGGTTA

CoxB2標準品序列為：

ATTTCCTTGC????ACGATCAGCA????TGTGTGTTTT????ACACGACATA????CACCAACAGC

AAAAATGCAG????CCAAAGAAAA????GAAGTTTGCG????ACATGGAAGG????TGAGTGTTAG

ACAGGCTGCA????CAACTGA

CoxB3標準品序列為：?

ACCAGGGGGT????CCAGTAGCAG????ATAAAGTGGA????TTCATATGTA????TGGCAAACTT

CCACGAACCC????AAGTGTGTTC????TGGACAGAGG????GTAATGCACC????ACCACGCATG

TCCATACCTT????TCCTGAGCAT????TGG

腸道病毒標準品序列為：

AGTCCTCCGG????CCCCTGAATG????CGGCTAATCC????CAACTGCGGA????GCACACGCCC

ACAAGCCAGC????GGGTAGTGTG????TCGTAACGGG????TAACTCTGCA????GCGGAACCGA

CTACTTTGGG????TGTCCGTGTT????TCCTTTTATC????TTTATATTGG????CTGCTTATGG

TGACAATTAA????AGAATT。