[發(fā)明專利]一種增加讀長(zhǎng)的測(cè)序方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201210047879.6 | 申請(qǐng)日： | 2012-02-28 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN102534040A | 公開(kāi)（公告）日： | 2012-07-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 盛司潼 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 盛司潼 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/68 | 分類號(hào)： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暫無(wú)信息 | 代理人： | 暫無(wú)信息 |
| 地址： | 518057 廣東省深圳市南山區(qū)*** | 國(guó)省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書(shū)： | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū)： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 增加 方法 | ||
1.一種增加讀長(zhǎng)的測(cè)序方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
A.將第一anchor結(jié)合于待測(cè)核酸片段的接頭上，該第一anchor帶有酶切識(shí)別位點(diǎn)；
B.在第一anchor延伸末端連接熒光探針，檢測(cè)其熒光信號(hào)，更換熒光探針并重復(fù)連接和檢測(cè)操作，得到延伸末端后M個(gè)核苷酸序列信息；
C.利用酶切識(shí)別位點(diǎn)，以切刻內(nèi)切酶進(jìn)行酶切，得到在第一anchor延伸末端后保留N個(gè)核苷酸的酶切產(chǎn)物；
D.將酶切產(chǎn)物與熒光探針連接，檢測(cè)其熒光信號(hào)，更換熒光探針并重復(fù)連接和檢測(cè)操作，得到第M+1至N+K位的核苷酸序列信息；
其中，M、N、K均為正整數(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的增加讀長(zhǎng)的測(cè)序方法，其特征在于，所述第一anchor上帶有至少一個(gè)dU堿基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增加讀長(zhǎng)的測(cè)序方法，其特征在于，所述第一anchor的一端是封閉的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增加讀長(zhǎng)的測(cè)序方法，其特征在于，所述步驟C包括以下步驟：
C1.將熒光探針與第一anchor洗脫，錨定第二anchor并在其延伸末端連接自由探針，得到自由探針復(fù)合物；
C2.利用自由探針復(fù)合物所帶酶切識(shí)別位點(diǎn)，以切刻內(nèi)切酶酶切，得到在第一anchor延伸末端后保留N個(gè)核苷酸的酶切產(chǎn)物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的增加讀長(zhǎng)的測(cè)序方法，其特征在于，所述第一anchor和第二anchor相同或不同，當(dāng)?shù)谝籥nchor和第二anchor不同時(shí)，第二anchor在延伸末端較第一anchor少L個(gè)核苷酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的增加讀長(zhǎng)的測(cè)序方法，其特征在于，步驟C1中所述第一anchor上帶有至少一個(gè)dU堿基。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的增加讀長(zhǎng)的測(cè)序方法，其特征在于，所述第二anchor上帶有至少一個(gè)dU堿基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的增加讀長(zhǎng)的測(cè)序方法，其特征在于，所述步驟D通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)：
D1.將酶切產(chǎn)物與熒光探針連接，檢測(cè)該熒光探針的熒光信號(hào)，得到相應(yīng)位置的核苷酸序列信息；
D2.將熒光探針去除，連接標(biāo)記位置不同的熒光探針，檢測(cè)該熒光探針的熒光信號(hào)，得到相應(yīng)位置的核苷酸序列信息；
D3.重復(fù)步驟D2的操作，直至得到第M+1至N+K位的核苷酸序列信息。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的增加讀長(zhǎng)的測(cè)序方法，其特征在于，步驟D2包括以下步驟：
D21.利用酶切產(chǎn)物所帶酶切識(shí)別位點(diǎn)，以切刻內(nèi)切酶切掉熒光探針與酶切產(chǎn)物之間的連接，并將熒光探針洗脫；
D22.將標(biāo)記位置不同的熒光探針與酶切產(chǎn)物連接，檢測(cè)該熒光探針的熒光信號(hào)，得到相應(yīng)位置的核苷酸序列信息。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的增加讀長(zhǎng)的測(cè)序方法，其特征在于，步驟D2包括以下步驟：
D21’.將酶切產(chǎn)物中的anchor與保留的核苷酸以及連接的熒光探針通過(guò)解離進(jìn)行洗脫；
D22’.利用雜交anchor-連接探針-切刻內(nèi)切酶酶切的步驟，重新制備酶切產(chǎn)物；
D23’.將標(biāo)記位置不同的熒光探針與酶切產(chǎn)物連接，檢測(cè)該熒光探針的熒光信號(hào)，得到相應(yīng)位置的核苷酸序列信息。
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