[發明專利]一種治療血管瘤的蛋白質

無效

• 申請號: 201210047413.6
• 申請日: 2012-02-21
• 公開（公告）號: CN103215257A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 張愛聯;張澤華;沈錦城;張添元;羅進賢;尹慧祥
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所;海南金寶正誠礦業有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C07K14/00;A61K38/16;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種蛋白質，具體涉及一種用于治療血管瘤的蛋白質。

背景技術

血管瘤(hemangioma)是以內皮細胞增生為特征的腫瘤，發病率：新生兒1％-2％，1歲時12％，體重低于1000g的早產兒發病率為22.9％，大約80％的血管瘤是單發，20％是多發[1]。血管瘤于出生后第一年生長迅速，1歲后生長速度減緩。血管瘤可見于身體的任何部位，以外表的血管瘤為多見，大約10％血管瘤發生于體內重要部位。生長在外表的血管瘤破壞周圍組織，有些血管瘤呈浸潤性生長，從而造成兒童美容缺陷。另外也可導致功能障礙。在少許情況下，血管瘤又有惡性進程特點，可出現諸多的并發癥如：潰爛、出血、感染等；生長在體內的血管瘤壓迫周圍組織，影響臟器功能，如眶內血管瘤影響視力，縱隔或肺部血管瘤影響壓迫氣道，肝臟或腹腔多發血管瘤造成臟器受壓。巨大血管瘤可引起高排出量性心衰以及Kasabach-Merritt綜合征(巨大血管瘤伴血小板減少綜合征，KMS)等危及生命合并癥。KMS占嬰兒血管瘤的0.3-1％。因為大約25％的血管瘤在達到最大體積時能自行衰退，對于那些小的、位于不可能產生功能損害的部位以及慢生長的血管瘤，可以期待其衰退；但對于那些可以引起KMS，或影響視覺、呼吸、吞咽、泌尿、胃腸道和供血等生理功能，或快速生長以至于可以產生組織破壞，畸形或毀容，潰瘍和大面積的皮膚枯斑的那些影響人的機體健康和身心健康的血管瘤則必須及時治療。

至今尚沒有有效的治療血管瘤的化學藥物。而手術、冷凍、激光、放射、硬化劑、物理、激素等方法治療的病例，經過遠期隨訪，證實有后余損害，美容效果不理想，其并發癥可達50％，并有30％的復發率。當前，亟待于開發新的抑制眼睛血管增生的藥物。

發明內容

本發明的目的是提供一種治療血管瘤的蛋白質。是通過DNA序列合成方法合成一段DNA序列，將這段DNA序列重組于畢赤酵母中表達，表達產物活性分析證明，所合成基因編碼的蛋白具有抑制血管新生和治療血管瘤的功能。其核苷酸序列和它的氨基酸序列如序列表中所述。

本發明的目的是通過以下技術措施實現：

1.DNA序列的合成

設計如下DNA序列，并用套疊PCR方法進行其序列合成。將其序列命名為scl。

ATGCACGGAGACTCAGAATACAACATCATGTTTGGTCCCGACATCTGTGGCCCTGGCAC

CAAGAAGGTTCATGTCATCTTCAACTACAAGGGCAAGAACGTGCTGATCAACAAGGACA

TCCGTTGCAAGGATGATGAGTTTACACACCTTACACTGATTGTGCGGCCAGACAACCAT

CATCATCATCATCATTAG

2.DNA序列編碼蛋白功能的證明

(1)DNA序列重組于酵母中表達

通過DNA內切酶和T4DNA連接酶的作用，將以上合成的DNA片段插入畢赤酵母(Pichia?pastoris)表達載體pPIC9K的多克隆位點，將其表達載體命名為pPIC9K-scl(附圖1)。用電轉法將pPIC9K-scl轉化畢赤酵母GS115，獲得工程菌GS115(pPIC9K-scl)。用BMGY-BMMY發酵GS115(pPICP9K-scl)誘導表達Scl蛋白。

(2)表達產物活性分析

發酵液上清過離子交換柱和Ni-Agarose?His標簽蛋白純化柱進行純化(附圖2)，收獲的含目標蛋白的液體經過抽濾除鹽后，進行抑制抑制雞胚絨毛尿囊膜血管生成試驗驗證其具有抑制新生血管生成的活性，并且，其抑制血管生成的活性強于血管生成抑制因子Angiostatin。用DeadEndTM?Fluorometric?TUNEL?System(Promega)試劑盒進行實驗證明Scl顯著地誘發血管瘤細胞凋亡(P＜0.01)(附圖3)，用噻唑藍法細胞毒性試驗證明Scl抑制血管瘤細胞增殖(P＜0.01))(附圖4)。將人體的血管瘤細胞接種于裸鼠建立人體血管瘤模型，然后用Scl蛋白進行治療證明Scl蛋白能有效地治療血管瘤，是一種治療人體血管瘤的藥物。

本發明是人工合成scl基因序列，將scl基因重組于畢赤酵母基因組進行表達獲得Scl蛋白，Scl蛋白可有效地誘發血管內皮細胞凋亡率，抑制人體血管內皮細胞增殖，有效地抑制和治療血管瘤，為生產特效的抑制人體血管瘤的藥物的開發創造了必要的條件，具有重要的理論和實踐意義。

附圖說明