[發明專利]快速檢測咖啡因的膠體金檢測試劑盒及其制備工藝

有效

• 申請號: 201210046239.3
• 申請日: 2012-02-27
• 公開（公告）號: CN102590521A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 張國華
• 申請（專利權）人: 上海凱創生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種咖啡因膠體金檢測試劑盒，包括試劑條，試劑條從加樣端開始依次為濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙，免疫膠體金紙片上包被有膠體金標記的抗咖啡因-BSA單克隆抗體，硝酸纖維素膜上的檢測區噴點有咖啡因-載體復合物、質控區噴點有羊抗鼠免疫球蛋白IgG。

2.如權利要求1所述咖啡因膠體金檢測試劑盒，其特征在于，所述膠體金標記的抗咖啡因-BSA單克隆抗體中，膠體金為粒徑39-42nm的球形顆粒。

3.如權利要求1所述咖啡因膠體金檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

1)用兩步還原法制備平均粒徑為39-42nm的膠體金；

2)采用步驟1制得的膠體金標記抗咖啡因-BSA單克隆抗體獲得免疫膠體金；

3)采用噴金緩沖液稀釋步驟2)的免疫膠體金獲得免疫膠體金溶液，用免疫膠體金溶液噴涂經預處理的玻璃纖維墊片，制得免疫膠體金紙片；

4)在硝酸纖維素膜的檢測線和質控線上分別噴點咖啡因-載體復合物及羊抗鼠免疫球蛋白IgG，制得免疫硝酸纖維素膜；

5)將濾樣紙、步驟3制備的免疫膠體金紙片、步驟4制備的免疫硝酸纖維素膜、吸水紙依次粘貼在膠板上，切裁制得檢測試劑條；最后將檢測試劑條裝入塑料盒制得檢測試劑盒。

4.如權利要求3所述咖啡因膠體金檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，步驟1)所述兩步還原法制備平均粒徑為39-42nm的膠體金具體包括下列步驟：

a)第一次還原氯金酸溶液：

制備濃度為0.0004-0.0005mol/L的HAuCl₄水溶液，加熱煮沸20-30分鐘，之后邊攪拌邊加入檸檬酸三鈉水溶液，HAuCl₄與檸檬酸三鈉的摩爾比為1∶(8-9)，超聲振蕩2-3分鐘后冷卻至室溫，既制得14～16nm粒徑的膠體金原溶液；

b)第二次還原氯金酸溶液：

將第一步制得的膠體金原溶液放置于4.0-4.5℃恒溫冰浴中穩定溫度，隨后按膠體金原溶液與HAuCl₄水溶液體積比1∶(1.9-2.0)加入4.0-4.5℃的0.003-0.004mol/L?HAuCl₄水溶液，隨后立即邊攪拌邊滴加4.0-4.5℃的抗壞血酸與PVP(聚乙烯醇吡咯烷酮)的混合水溶液，加入的抗壞血酸與本步驟加入的HAuCl₄的摩爾比為(25-26)∶1，加入的PVP與本步驟加入的HAuCl₄的重量比為1∶(2.0-2.1)，反應中保持溫度恒定，攪拌至反應完全，溶液呈透明的酒紅色，既制得39-42nm粒徑的膠體金溶液；

兩步還原法中，配置各種水溶液均采用雙蒸水。

5.如權利要求4所述咖啡因膠體金檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，步驟a)中，加入檸檬酸三鈉水溶液的濃度為0.01-0.02mol/L。

6.如權利要求4所述咖啡因膠體金檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，步驟b)中，所述抗壞血酸與PVP的混合雙蒸水水溶液中，抗壞血酸的濃度為0.017-0.019mol/L，PVP的濃度為0.137-0.139g/L。

7.如權利要求3所述咖啡因膠體金檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，步驟3)免疫膠體金紙片的制備包括下列步驟：

I.用噴金緩沖液稀釋步驟2)的免疫膠體金，獲得OD₅₄₀值為1.0～2.0的免疫膠體金溶液；

II.用預處理液浸泡玻璃纖維紙，干燥后，再用免疫膠體金溶液噴涂玻璃纖維紙，干燥，制得免疫膠體金紙片。

8.如權利要求7所述咖啡因膠體金檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，步驟I所述噴金緩沖液的組分為：8～12v％1.0M?Tris液、0.2～0.4w/v％聚乙二醇20000、0.15～0.25w/v％牛血清白蛋白，0.1～0.3w/v％脫脂牛奶、0.25～0.35w/v％酪蛋白，和0.02～0.08w/v％疊氮化鈉，用鹽酸調節pH至8.5±0.05，余量為水。

9.如權利要求7所述咖啡因膠體金檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，步驟II所述預處理液的組分包括：0.5～0.8v％Tween-20，12～18w/v％蔗糖，溶劑為水。