[發明專利]一種空腸彎曲菌的高靈敏快速檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201210045964.9
• 申請日: 2012-02-27
• 公開（公告）號: CN102534038A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 李燁;王小元;史鋒;徐洋
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 王秀麗

1.一種空腸彎曲菌的高靈敏快速檢測試劑盒，其特征在于包括檢測靶點為空腸彎曲菌高度保守的鞭毛合成相關基因flhA，其核苷酸序列GeneBank基因登錄號為905174；四條可環介導等溫擴增靶序列的特異性引物、2條內引物flhA-FIP、flhA-BIP和2條外引物flhA-F3、flhA-B3，引物序列如下：

flhA-FIP?5′-ACCCTTGTACTACCTTTTGTTACAA-GTGGAAATATGGTCA-3′

flhA-BIP?5′-ACAAGCAAGATTTACACTTGATGC-GTCCTGCATTTAAATCCG-3′

flhA-F35′-GCATTTGGAGAATTTGTTGTTG-3′

flhA-B35′-TTGACGTCTTGCTCTAGC-3′。

2.應用權利要求1所述的試劑盒檢測空腸彎曲菌的方法為：

(1)提取細菌基因組DNA；

(2)混合環介導等溫擴增反應體系：在無菌的微量離心管中加入2.5uL?10×buffer、2uL?10umol/L?flhA-FIP、2uL?10umol/L?flhA-BIP、0.5uL5umol/L?flhA-F3、0.5uL5umol/L?flhA-B3、4uL10mmol/LdNTPs、1uLDNA模板、11.5uL的ddH2O；

(3)加熱變性：將上述混合體系置95℃水浴5min，迅速插入冰中30秒；

(4)在混合體系中加入1uL8UBstDNA?polymerase?large?fragment，完全混合。

(5)環介導等溫擴增：將反應混合物置63℃水浴中60分鐘，然后80℃水浴放置20分鐘終止環介導等溫擴增反應。

(6)電泳分析環介導等溫擴增結果：取4uL擴增反應混合物，用2.0％瓊脂糖凝膠電泳分析，紫外光下觀察電泳結果。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于所述環介導等溫擴增反應體系為：