[發(fā)明專利]丹參素衍生物在制備防治心血管相關疾病藥物中的用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210044699.2
• 申請日: 2012-02-27
• 公開（公告）號: CN103284989A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發(fā)明（設計）人: 朱依諄;王洋;鄭洪明;董曉易;賈堯玲
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: A61K31/216
• 分類號: A61K31/216;A61P9/00
• 代理公司: 上海元一成知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發(fā)明屬中藥制藥領域，涉及中草藥丹參中的特異單體丹參素的衍生物在制備藥物組合物中的應用，尤其是在制備防治心血管相關疾病的藥物組合物中的應用。

背景技術

心血管疾病又稱為循環(huán)系統(tǒng)疾病，通常循環(huán)系統(tǒng)指人體內(nèi)運送血液的器官和組織，主要包括心臟、血管(動脈、靜脈、微血管)，循環(huán)系統(tǒng)疾病可以細分為急性和慢性，一般都是與動脈硬化有關。

現(xiàn)有技術公開了丹參為雙子葉植物唇形科鼠尾草屬植物丹參Salvia?miltiorrhiza?Bge.的干燥根及根莖。出于《神農(nóng)本草經(jīng)》，生于山坡草地林邊道旁，或疏林干燥地上。性味苦，微寒，歸心、肝經(jīng)。其功效主要有活血調(diào)經(jīng)，祛瘀止痛，涼血消癰，清心除煩，養(yǎng)血安神。丹參素(Danshensu，化學名：(R)-(+)-3-(3，4-二羥基苯基)-2-羥基丙酸)作為丹參中的有效成分之一，其抗氧化、抗凋亡的作用也有相關報道，本領域研究人員對有關丹參中的有效成分結構及其作用效果、作用機制長期以來一直在改進和探討中。

丹參素

目前檢測該點突變的方法主要是聚合酶鏈式反應(PCR)后進行測序，但是這一方法中的測序耗時且需要的儀器和試劑成本較高，不適合大規(guī)模推廣使用。本發(fā)明經(jīng)過長期艱苦的研究，并結合一些篩選的運氣，研究出了一對引物并且研究出了配套的方法，可以通過PCR擴增產(chǎn)物的熔解分析而快速獲得結果，其中無需耗時的步驟，而且熔解分析儀的維護成本比測序儀要低。由于人群的突變基因的比率很低，實踐中一一檢測的效率很低，因此往往用多人的混合樣品進行檢測，更加令人意想不到的是，本發(fā)明人研究出來的檢測方法能夠分辨只含1％(甚至更低)的突變型的樣品，而這是測序所無法完成的，因此提高了檢測效率。已有研究表明，氧化應激在心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展中扮演了重要的角色。本發(fā)明經(jīng)過長期艱苦的研究，嘗試對丹參素進行結構改造，并結合L-半胱氨酸為人體內(nèi)源性的氨基酸，無毒、穩(wěn)定并具有明顯的抗氧化作用，因此，根據(jù)互聯(lián)體前藥原理，研究設計合成了丹參素與L-半胱氨酸衍生物通過酰胺鍵結合的互聯(lián)體前藥(1)，可以通過丹參素與L-半胱氨酸衍生物的結合體既能將不穩(wěn)定的結構因素(兩個酚羥基)保護起來、提高脂溶性，又能分別釋放藥物活性成分，有望通過協(xié)同作用增強活性研究，探究新合成的丹參素衍生物對過氧化氫誘導的內(nèi)皮細胞的保護作用，為研發(fā)新的治療心血管疾病的藥物提供新的思路。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供中草藥丹參中的丹參素衍生物在制備防治心血管相關疾病藥物中的用途，尤其是丹參中的特異單體丹參素的衍生物在制備藥防治心血管疾病相關病的藥物組合物中的應用。

本發(fā)明所述的丹參素衍生物具有如下結構特征：

其中R¹、R²、R³為低級?；驘N基，R⁴為低級烴基，如甲叉基、甲基、乙基、丙基、異丙基、芐基、乙?；⒈；虮郊柞；?。本發(fā)明中，代表化合物是(2R)-3-芐硫基-2-[2-乙酰氧基-3-(3，4-二乙酰氧基苯基)丙酰氨基]丙酸甲酯(1)的立體異構體及其類似物，結構如下：

本發(fā)明通過過氧化氫(H₂O₂)誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)氧化應激模型觀察了該丹參素衍生物對細胞的尤其是內(nèi)皮細胞的保護作用。通過MTT、LDH漏出率檢測方法、JC-1染色流式細胞術等方法檢測該丹參素衍生物對細胞存活率和凋亡的影響，通過Western?blot方法檢測該丹參素衍生物對凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2、cPARP的表達以及通過MDA測定說明丹參素衍生物對細胞內(nèi)MDA的影響，實驗結果顯示，所述的丹參素衍生物通過保護循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)皮細胞防治心血管相關疾病。更具體的，所述的丹參素衍生物能通過抑制心血管疾病相關基因的轉錄水平，抑制心血管疾病相關基因的蛋白表達水平，抑制活性氧簇的產(chǎn)生以及抑制相應的信號轉導通路及轉錄因子發(fā)揮保護內(nèi)皮細胞作用。

實驗結果表明，所述的丹參素衍生物(1)對H₂O₂誘導的HUVEC細胞的凋亡具有明顯的抑制作用，該丹參素衍生物對氧化應激損傷細胞具有顯著的保護作用，該丹參素衍生物可制備防治心血管疾病相關疾病的藥物。

為了便于理解，以下將通過具體的附圖和具體實施方式對本發(fā)明進行詳細地描述。需要特別指出的是，這些描述僅僅是示例性的描述，并不構成對本發(fā)明范圍的限制。依據(jù)本說明書的論述，本發(fā)明的許多變化、改變對所屬領域技術人員來說都是顯而易見的。