[發明專利]一種沙丁胺醇人工抗原及其制備的抗體

有效

• 申請號: 201210044287.9
• 申請日: 2012-02-23
• 公開（公告）號: CN102617516A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 沈建忠;江海洋;曹興元;丁雙陽;史為民;王戰輝;張素霞;李建成
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07D303/24
• 分類號: C07D303/24;C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44;C12N5/20;G01N33/577
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種沙丁胺醇人工抗原及其制備的抗體。

背景技術

沙丁胺醇(Salbutamol)，是一種選擇性β2-受體激動劑(β-興奮劑)，醫療中用于治療喘息型支氣管炎、支氣管哮喘、肺氣腫所致的支氣管痙攣。該藥物不是獸藥，也不是飼料添加劑。由于沙丁胺醇檢測手段的相對滯后，但又與克倫特羅具有同樣促生長效果，因而逐步取代克倫特羅成為新一代“瘦肉精”，用于非法謀取經濟利益。沙丁胺醇作為營養重分配劑添加到飼料中，可以促進動物瘦肉生長、減少脂肪產生、提升單位經濟價值，但同時也會造成藥物蓄積、殘留在動物機體中。沙丁胺醇一次性攝入量較多時對人體存在多種毒副作用，可導致體內聚集濃度升高而繼發心臟肥大，并造成心臟跳動過速，嚴重時會出現心肌梗死，長期攝入過量沙丁胺醇，可能產生生殖內分泌毒性。世界衛生組織、美國、歐盟及一些發達國家等都先后立法禁止在畜禽生產中使用β-興奮劑作為促動物生長飼料添加劑。我國在農業部第235號公告中明確規定了禁止使用沙丁胺醇，并不得在所有動物性食品中檢出。

目前，國家標準和行業標準中對飼料及動物源性食品中沙丁胺醇殘留的檢測常采用液相色譜-質譜/質譜法。雖然此方法特異性強、靈敏度高，但是樣品前處理操作步驟繁瑣，成本較高，也不適用于大批量樣品的篩選檢測。免疫分析，由于在抗原抗體的定性定量方面獨特的優勢和操作簡便快速、成本低、靈敏度較高、分析樣本量大的優點彌補了理化分析的不足，在β-興奮劑的殘留檢測中起著越來越重要的作用。

影響免疫化學分析質量的根本因素是抗體的特異性與親和性，這些性質又決定于免疫半抗原分子的結構，因此免疫半抗原的分子設計與合成就是產生特異性抗體和建立小分子獸藥殘留快速檢測技術最基礎和最關鍵的步驟。

發明內容

本發明的目的是提供一種沙丁胺醇人工抗原及其制備的抗體。

本發明提供了一種化合物，即式(I)所示化合物。式(I)所示化合物為將沙丁胺醇進行結構改造得到的化合物，在沙丁胺醇的苯酚基上引入活性官能團結構，既最大程度保留了沙丁胺醇的特征結構，又具有可以與載體蛋白發生偶聯的活性基團。

本發明還保護式(I)所示化合物的制備方法，包括如下步驟：將沙丁胺醇與乙二醇二縮水甘油醚反應，獲得所述化合物。所述反應具體可在碳酸氫鈉水溶液中進行。優選濃度為3％(質量比)的碳酸氫鈉水溶液。所述沙丁胺醇與乙二醇二縮水甘油醚的物質的量比具體可為1∶1。

式(I)

本發明還保護一種沙丁胺醇人工抗原，為將式(I)所示化合物與載體蛋白偶聯得到的偶聯物。所述載體蛋白為牛血清白蛋白或卵清白蛋白。式(I)所示化合物與載體蛋白的偶聯比具體可為(8-11)∶1。所述偶聯比指的是摩爾比。式(I)所示化合物與所述載體蛋白可以以碳氮鍵偶聯。沙丁胺醇的人工抗原在沙丁胺醇與載體蛋白間含有一個間隔臂。所述沙丁胺醇人工抗原可以作為免疫原也可以作為包被原。將所述沙丁胺醇人工抗原免疫動物，可獲得高特異性的單克隆抗體和多克隆抗體，方法簡便、易行。將所述沙丁胺醇人工抗原包被酶標板，也可以用于沙丁胺醇抗血清的檢測。包被原與免疫原結構上的差異可以進一步提高檢測的靈敏度和特異性。沙丁胺醇人工抗原如式(II)所示。

式(II)。

所述沙丁胺醇人工抗原可用于制備沙丁胺醇特異性抗體。所述抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。

以所述沙丁胺醇人工抗原為免疫原制備得到的抗體也屬于本發明的保護范圍。所述抗體可為單克隆抗體或多克隆抗體。所述單克隆抗體具體可為抗沙丁胺醇單克隆抗體雜交瘤細胞2E9分泌的單克隆抗體。

本發明還保護一種雜交瘤細胞，命名為抗沙丁胺醇單克隆抗體雜交瘤細胞2E9，簡稱雜交瘤細胞2E9，已于2012年2月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號)，保藏號為CGMCC?No.5791。

所述雜交瘤細胞2E9分泌的單克隆抗體也屬于本發明的保護范圍。

所述人工抗原可用于檢測沙丁胺醇。

所述抗體(單克隆抗體或多克隆抗體)可用于檢測沙丁胺醇。

本發明對于沙丁胺醇的檢測具有重大價值。

附圖說明

圖1為沙丁胺醇人工抗原的紫外光譜圖。

圖2為沙丁胺醇的標準曲線圖。

具體實施方式