[發(fā)明專利]一種微生物還原和化學催化氫化組合制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210043659.6
• 申請日: 2012-02-24
• 公開（公告）號: CN102586349A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設計）人: 徐紅梅;夏仕文;方國蘭
• 申請（專利權）人: 重慶郵電大學;重慶惠健生物科技有限公司
• 主分類號: C12P7/62
• 分類號: C12P7/62;C07C69/732;C07C67/317;C12R1/05;C12R1/06;C12R1/025;C12R1/72;C12R1/645
• 代理公司: 重慶市恒信知識產權代理有限公司 50102
• 代理人: 劉小紅

技術領域

本發(fā)明涉及一種微生物還原和化學催化氫化組合制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯方法，屬于生物-化學催化還原手性藥物中間體技術領域。

背景技術

（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯是血管緊張素轉化酶抑制劑-普利類抗高血壓藥物的關鍵手性中間體，其制備方法主要包括化學法和生物法。

化學法：化學法包括化學拆分法和化學不對稱合成法。

化學拆分法通常采用手性有機胺如（S）-1-對苯基乙胺、（S）-2-苯基-3-甲基丁胺、氯霉素中間體D-（-）-蘇式-2-氨基-1（4-硝基苯基）-1，3-丙二醇為拆分劑對（R,S）-2-羥基-4-苯基丁酸進行拆分，然后酯化為（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯。由于手性胺價格通常比較昂貴，拆分收率低，因而使用價值不大。

以D-蘋果酸等為手性源合成（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯（例如公開號EP0759424），不僅手性源價格昂貴，而且步驟繁多，副產物多，導致分離純化困難。采用Pt/Al₂O₃/H₂體系，以10，11-二氫辛可尼定和10，11-二氫辛可尼定甲醚為手性修飾催化氫化2-羰基-4-苯基丁酸乙酯為（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯，需要高溫高壓，對映選擇性不高（ee?91%）（J?Am?Chem?Soc，1999，121，4920-4921）。

生物法：生物法包括生物拆分法和生物合成法。

生物拆分法通常以脂肪酶如Novozymes?435、Pseudomonas?cepacia脂肪酶為生物催化劑催化（R,S）-2-羥基-4-苯基丁酸（乙酯）的對映選擇性?；蛩庵苽洌?i>R）-2-羥基-4-苯基丁酸（乙酯）。盡管這些脂肪酶具有高度的對映選擇性，但生物拆分同化學拆分一樣，產物的分離困難，理論收率僅為50%，而且另一對映體（S）-2-羥基-4-苯基丁酸（乙酯）很難消旋化。

與生物拆分法相比，以產羰基還原酶菌株的整細胞為生物催化劑，通過2-羧基-4-苯基丁酸（乙酯）對映選擇性還原制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸（乙酯）更有潛在的應用價值。Stewart等（J?Mol?Catal?B:?Enzymatic,?2002,?17,?101-105）采用源于Saccharomyces?cerevisiae的脫氫酶Yprlp，以NADH為輔酶，還原2-羰基-4-苯基丁酸乙酯，得到（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯（97%?ee）。Yun等人（Biotechnol?Prog,?2005,?21,?366-371）采用重組E.coli?BL21，在NADPH存在下，還原2-羰基-4-苯基丁酸得到97%?ee的（R）-2-羥基-4-苯基丁酸。Baskar等（J?Mol?Catal?B:?Enzymatic,?2004,?27,?13-17）報道了采用野生胡蘿卜細胞還原2-羰基-4-苯基丁酸乙酯，盡管ee達到99%，但反應時間太長，需要10天。以Candida?boidinii?CGMCC?2.2159整細胞催化2-羰基-4-苯基丁酸乙酯還原制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯，收率92%，ee?99%（CN101314784，Adv?Synth?Catal,?2008,?350,?426-430）。

以微生物整細胞為生物催化劑催化還原2-羰基-4-苯基丁酸乙酯制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯，由于2-羰基-4-苯基丁酸乙酯在水中的溶解度太差，不得不采用低的底物濃度，因而轉化效率太低。此外，作為原料的2-羰基-4-苯基丁酸乙酯通常是苯乙基溴和草酸二乙酯通過格氏反應合成的，因而成本較高。因此，開發(fā)更清潔的環(huán)境友好的（R）-2-羥基羥基-4-苯基丁酸乙酯制備方法是非常有意義的。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種微生物還原和化學催化氫化組合制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯的方法，提高（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯的收率和光學純度。