[發明專利]糖類抗原15-3時間分辨免疫熒光分析法及試劑盒

無效

• 申請號: 201210043005.3
• 申請日: 2012-02-24
• 公開（公告）號: CN103293313A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 夏秋蘭;張小寒;于春紅;楊揮
• 申請（專利權）人: 上海新波生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 高月紅

1.一種糖類抗原15-3時間分辨免疫熒光分析法，其特征在于：包括步驟：

①固相抗體制備

將抗糖類抗原15-3單克隆抗體稀釋后，作為包被液，包被固相材料，形成具有固相抗體的固相材料；

②鑭系元素離子標記抗體制備

選用配對抗糖類抗原15-3單克隆抗體，進行鑭系元素離子標記，形成標記抗體；

③在步驟①制得的具有固相抗體的固相材料中，加入糖類抗原15-3標準品或待測樣品，以及反應緩沖液，經孵育、洗滌固相材料后，加入稀釋的標記抗體，再次孵育后進行熒光檢測。

2.如權利要求1所述的分析法，其特征在于：所述步驟①中，具體制備步驟，包括：

(1)將抗糖類抗原15-3單克隆抗體用包被緩沖液稀釋至抗體濃度為1.0～10.0μg/ml，作為包被液，與固相材料接觸并靜置5～24小時；

其中，包被緩沖液包括：pH?7.2-7.6的50mM磷酸鹽緩沖溶液；

固相材料包括：微孔反應條、或由微孔反應條形成的微孔反應板；

(2)用含表面活性劑的緩沖液，洗滌步驟(1)制備的抗體包被的固相材料后，加入含封閉蛋白的緩沖液，靜置3～12小時；

其中，含表面活性劑的緩沖液，包括：含0.1％Tween-20的50mM?pH7.8TSA緩沖液，而50mM?pH?7.8TSA緩沖液為50mM?Tris，含150mM?NaCl、1％BSA、16％的蔗糖；

含封閉蛋白的緩沖液，包括：含0.5％酪蛋白的0.1％Tween-20的50mM?pH7.8TSA緩沖液；

(3)棄去含封閉蛋白的緩沖液，干燥固相材料，完成固相抗體制備。

3.如權利要求1所述的分析法，其特征在于：所述步驟②中，鑭系元素離子包括：Eu³⁺、Sm³⁺、De³⁺、Te³⁺；

鑭系元素離子與抗糖類抗原15-3單克隆抗體的質量比為1∶2～1∶1。

4.如權利要求3所述的分析法，其特征在于：所述步驟②中，鑭系元素離子為Eu³⁺。

5.如權利要求1所述的分析法，其特征在于：所述步驟③中，糖類抗原15-3標準品的制備方法為：先分別將糖類抗原15-3稀釋至所需的最高濃度，再采用倍比稀釋法稀釋至所需濃度，獲得糖類抗原15-3標準品。

6.如權利要求5所述的分析法，其特征在于：所述標準品為用含20％小牛血清、0.1％NaN₃的生理鹽水將糖類抗原15-3配制成標準品。

7.如權利要求1所述的分析法，其特征在于：所述步驟③中，反應緩沖液包括：pH?7.6-8.0的50mmol/L?Tris-HCl，內含0.9％NaCl、2％BSA、0.05％牛IgG、0.1％Tween-20和0.1％NaN₃。

8.如權利要求1所述的分析法，其特征在于：所述步驟③中，在20～25℃孵育1～2h后，采用含表面活性劑的緩沖液的稀釋液作為洗滌液，洗滌固相材料，其中，含表面活性劑的緩沖液，包括：含0.1％Tween-20的50mM?pH7.8TSA緩沖液，而50mM?pH?7.8TSA緩沖液為50mM?Tris，含150mM?NaCl、1％BSA、16％的蔗糖；

含表面活性劑的緩沖液的稀釋液，是將含表面活性劑的緩沖液與水以體積比為1∶24～1∶25的比例稀釋；

稀釋的標記抗體為：標記抗體用反應緩沖液以體積比為1∶20稀釋；稀釋的標記抗體濃度為1～5μg/ml；

再次孵育中，在20～25℃孵育1～2h。

9.如權利要求8所述的分析法，其特征在于：所述步驟③中，再次孵育之后，經再次洗滌固相材料后，加入增強液進行熒光檢測；

其中，增強液為含1.0％冰乙酸和2.0％鄰苯二甲酸氫鉀的緩沖液，pH?3.0-4.5，該緩沖液中同時含有0.4％β-萘基甲酰三氟丙酮、2％三正辛基氧膦、0.1％Triton?X-100。

10.如權利要求1所述的一種糖類抗原15-3定量檢測試劑盒，其特征在于：包括：包被抗糖類抗原15-3單克隆抗體的固相材料，反應緩沖液，鑭系元素離子標記的抗糖類抗原單克隆抗體，糖類抗原15-3標準品。

11.如權利要求10所述的試劑盒，其特征在于：還包括：洗滌液、增強液。