[發(fā)明專利]葡糖淀粉酶變體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210042998.2
• 申請日: 2008-04-08
• 公開（公告）號: CN102776164A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: W·埃赫勒;R·R·博特;I·尼古拉耶夫;M·謝弗斯;P·范索林恩;C·弗勒門
• 申請（專利權(quán)）人: 丹尼斯科美國公司
• 主分類號: C12N9/34
• 分類號: C12N9/34;C12N15/56;C12N1/21;C12N1/15;C12N1/19;C12N5/10;C12P19/20;C12P7/02;C12P7/06;C12P7/16;A23K1/165;C12R1/885
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 柴云峰;黃革生

1.分離的葡糖淀粉酶變體，其包含催化區(qū)和淀粉結(jié)合區(qū)(SBD)，

(a)所述催化區(qū)包含與SEQ?ID?NO：3的氨基酸序列至少85％的序列同一性，和

(b)所述SBD包含SEQ?ID?NO：2中或者如通過序列比對確定的在親本葡糖淀粉酶SBD中等同位置上的氨基酸取代N563I，N563C，N563E，N563A，N563K，N563L，N563Q，N563T或N563V；

所述葡糖淀粉酶變體與所述親本葡糖淀粉酶相比具有增加的熱穩(wěn)定性。

2.權(quán)利要求1的分離的葡糖淀粉酶變體，其中所述催化區(qū)與SEQ?ID?NO：3的氨基酸序列有至少90％或至少95％的序列同一性。

3.權(quán)利要求1的葡糖淀粉酶變體，其中所述親本葡糖淀粉酶包含與選自SEQ?ID?NO：11，SEQ?ID?NO：385，SEQ?ID?NO：386，SEQ?ID?NO：387，SEQ?ID?NO：388或SEQ?ID?NO：389的SBD有至少95％氨基酸序列同一性的SBD。

4.權(quán)利要求1的葡糖淀粉酶變體，其還包含在對應(yīng)于SEQ?ID?NO：2的493，494，495，501，502，503，508，511，517，518，519，520，525，527，531，533，535，536，537，538，539，540，545，546，547，549，551，561，567，569，577，579或583位的位置上或者如通過序列比對確定的在所述親本葡糖淀粉酶的等同位置上的一個或多個取代。

5.權(quán)利要求1的分離的葡糖淀粉酶變體，其還包含在對應(yīng)于SEQ?ID?NO：2或SEQ?ID?NO：3的殘基位置：10，14，15，23，42，45，46，59，60，61，67，68，72，73，97，98，99，102，108，110，113，114，122，124，125，133，140，144，145，147，152，153，164，175，182，204，205，214，216，219，228，229，230，231，236，239，240，241，242，244，263，264，265，268，269，276，284，291，300，301，303，310，311，313，316，338，342，344，346，349，359，361，364，379，382，390，391，393，394，408.410，415，417，418，430，431，433，436，442，443，444，448和451的位置上的一個或多個氨基酸取代。

6.權(quán)利要求1的葡糖淀粉酶變體，其中所述親本葡糖淀粉酶得自木霉。

7.編碼權(quán)利要求1的變體的多核苷酸。

8.包含權(quán)利要求7的多核苷酸的宿主細(xì)胞。

9.包含權(quán)利要求1的葡糖淀粉酶變體的酶組合物，其中該組合物適用于淀粉轉(zhuǎn)化過程、動物飼料配制或醇發(fā)酵過程。

10.根據(jù)權(quán)利要求9的酶組合物，其適用于淀粉轉(zhuǎn)化過程，還包含α淀粉酶。

11.在宿主細(xì)胞中產(chǎn)生變體葡糖淀粉酶的方法，包括用包含權(quán)利要求7的多核苷酸的DNA構(gòu)建體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞；在適于表達(dá)和產(chǎn)生所述葡糖淀粉酶變體的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞并產(chǎn)生所述變體。

12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，還包括從所述培養(yǎng)物回收葡糖淀粉酶變體。