[發明專利]一種利用梭菌、腸桿菌、酵母菌混合菌群發酵制氫的方法

無效

• 申請號: 201210042590.5
• 申請日: 2012-02-24
• 公開（公告）號: CN103290090A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 陳朋;嚴曉娟;胡先望;牛犇;梁寧;郭天力;廣忠勇;王雄
• 申請（專利權）人: 甘肅省商業科技研究所
• 主分類號: C12P39/00
• 分類號: C12P39/00;C12P3/00;C12R1/01;C12R1/145;C12R1/645
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 馬正良

1.一種利用梭菌、腸桿菌、酵母菌混合菌群發酵制氫的方法，其步驟是：

(1).純菌培養基的制備①營養肉汁培養基：分別稱取蛋白胨，牛肉提取物，氯化鈉，加入蒸餾水，混合均勻，使氫氧化鈉調整至pH7.0，1.05Kg/cm²滅菌20min；該培養基可用于Enterobacter?cloacae?ATCC?13047菌株生長；

②馬鈴薯葡萄糖培養基：取一定量洗凈去皮切碎馬鈴薯，加水煮沸，用紗布過濾，向其中加入葡萄糖，pH6.8，1.05Kg/cm²滅菌20min；該培養基可用于Kluyveromyces?marxianus?15D菌株生長；

③改良GAM肉湯培養基：培養基成分如下：胨，胰酪蛋白胨，酵母浸粉，牛肉粉，消化血清粉，牛肝浸粉，葡萄糖，磷酸二氫鉀，氯化鈉，可溶性淀粉，L-半胱氨酸，硫乙醇酸鈉。稱取改良GAM肉湯培養基，加入蒸餾水，加熱混合均勻，1.05Kg/cm²滅菌20min；該培養基可用于Clostridium?acetobutylicum?ATCC?824菌株生長；

(2).混合培養基的制備

①H1培養基：將營養肉汁培養基與馬鈴薯葡萄糖培養基分別配制后，按照比例1∶1均勻混合，然后向培養基中依次添加：Fe²⁺，Mg²⁺，K⁺離子，檸檬酸，以及果糖，葡萄糖，均勻混合，配制而成的H1培養基呈深黃色的透明澄清溶液；

②H2培養基將Enterobacter?cloacae?ATCC?13047與Kluyveromyces?marxianus?15D菌株用接種針接種至H1培養基，實驗在5L小型發酵罐中進行，裝液量3L，罐溫30℃，轉速200r/min，通氣量0.5L/min，接種量10％，罐壓0.1MPa，培養過程監測產氫效率，取樣量10ml，將Enterobacter?cloacae?ATCC?13047與Kluyveromyces?marxianus?15D菌株，用接種針接種至上述的H1培養基發酵產氫8h之后，10000r/min離心10min后，收集上清液，在上清液中加入改良GAM肉湯培養基37.0-148.0g，1.05Kg/cm²滅菌20min，該培養基即為H2培養基，將Clostridiumacetobutylicum?ATCC?824菌株用接種針接入H2培養基后厭氧培養，構建需氧-兼性厭氧-厭氧菌群分步制氫體系。