[發(fā)明專利]一種提取肺間充質干細胞的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210042015.5
• 申請日: 2012-02-22
• 公開（公告）號: CN102559591A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設計）人: 白春學;童琳;宋元林
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬中山醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，具體涉及一種大量提取肺間充質干細胞的方法。

背景技術

干細胞研究在近10余年有了快速的進展。干細胞治療在許多動物疾病模型上顯示出了良好的治療效果。如間充質干細胞經氣管內滴注或經靜脈注射可以明顯減輕LPS或細菌導致的急性肺損傷。間充質干細胞還可以減輕心肌梗塞導致的心肌缺血。體內研究發(fā)現，KGF-2具有抗纖維化作用，對博萊霉素誘導的肺纖維化有保護作用。體外研究發(fā)現，KGF-2對機械牽張力誘導的肺泡上皮細胞DNA損傷及凋亡具有保護作用，對過氧化物及石棉誘導的肺泡上皮細胞損傷也具有保護作用，且這種保護作用由MAPK信號通路介導。此外，研究還發(fā)現KGF-2可短效調節(jié)Na，K-ATP酶的活性。歐洲的一項7000例慢性阻塞性支氣管炎的患者在接受干細胞治療后6個月出現肺功能的改善。間充質干細胞在治療效果上甚至還優(yōu)于胚胎干細胞。從療效和倫理的角度，間充質干細胞分離和培養(yǎng)有巨大的優(yōu)勢。

與異體干細胞相比，自體干細胞治療更有優(yōu)越性，如避免了可能存在的感染風險，以及潛在的免疫排斥反應等。自體干細胞分離和培養(yǎng)一般有幾個途徑，如骨髓的干細胞分離，臍帶血的干細胞分離以及組織器官特異性的干細胞分離。有研究顯示肺損傷后的修復主要來源于肺組織內的干細胞。組織原位的干細胞在調節(jié)炎癥反應，組織修復，纖維化控制，血管再生等方面有重要作用。因此，對于肺部疾病的治療，直接分離出肺的干細胞進行培養(yǎng)后回輸治療肺部疾病有特別的意義。

目前在動物實驗上分離肺組織的干細胞往往需要先分離出肺組織，剪碎，研磨，培養(yǎng)，流式細胞儀篩選后繼續(xù)培養(yǎng)，然后再進行干細胞的鑒定。過程復雜，更重要的是需要把肺切碎。另外一種方法是通過肺泡灌洗分離肺原位干細胞。這個方法已經在動物實驗和志愿者身上進行了探索。動物實驗的研究結果表明單純支氣管肺泡灌洗能得到的干細胞數目很少，對進行實驗研究造成了極大的不便。如果能預處理肺臟，然后進行肺泡灌洗，明顯提高原位干細胞分離效率的話，不僅是一個重要的新型技術，而且會有潛在的重要臨床應用價值。

角質細胞生長因子-2(keratinocyte?growth?factor-2，KGF-2)是成纖維細胞生長因子家族中的23個成員之一，又稱為成纖維細胞生長因子-10(fibroblast?growth?factor-10，FGF-10)。人KGF-2是1997年Emoto等首先從人的肺中分離出的具有肝素結合特異性的單鏈多肽，因與1989年發(fā)現的KGF在結構、性質、功能等方面的同源性而得名。KGF-2包含208個氨基酸，其N端是由39個疏水氨基酸組成的信號肽序列，其分子結構與小鼠的同源性達96％。KGF-2由成纖維細胞和其它間充質來源的細胞分泌，特異性作用表達于上皮細胞表面的酪氨酸激酶受體，以間質-上皮相互作用的旁分泌方式有效地促進各種來源上皮細胞的增殖、移行和分化。