[發明專利]棘白菌素產生菌株及其應用

有效

• 申請號: 201210041876.1
• 申請日: 2012-02-22
• 公開（公告）號: CN103289901B
• 公開（公告）日: 2017-04-19
• 發明（設計）人: 阮麗軍;孫新強;楊天;陳迎迎;羅敏玉;呂堅方;夏興;張磊
• 申請（專利權）人: 上海來益生物藥物研究開發中心有限責任公司;浙江醫藥股份有限公司新昌制藥廠
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P21/04;C12R1/66
• 代理公司: 上海華工專利事務所(普通合伙)31104
• 代理人: 應云平

技術領域

本發明屬于生物工程的技術領域，具體的說，是棘白菌素B產生菌株及其應用。

背景技術

在過去的二十多年時間里嚴重危害人類生命健康的真菌感染，無論是在死亡率以及感染的種類方面都在不斷的增加，特別是在免疫抑制病人中。目前用于治療臨床深部真菌感染的主要藥物是唑類抗真菌藥物和兩性霉素B。

雖然這兩類藥物對控制臨床深部真菌感染起到了重要的作用，但由于這些藥物具有以下三方面的不足，使深部真菌感染疾病的死亡率居高不下：

一是由于這兩類藥物的作用靶點都是真菌細胞膜，其選擇性差而導致產生較大的毒副作用；

二是由于臨床耐藥真菌的廣泛出現而使這些藥物療效降低；

三是這些藥物對諸如曲霉和白念珠菌等真菌的敏感性不強，致使臨床上難以控制這類真菌感染的疾病。

芬凈類(棘白菌素類)抗生素是20世紀70年代發現的一組天然產物，具有相同的環狀多肽核心和不同的脂肪酸側鏈的結構特征，能夠非競爭性地抑制真菌細胞壁β-1，3-葡聚糖合成酶的活性。其獨特的作用機制，不僅毒副作用低，且對一些唑類和兩性霉素B耐藥的真菌具有很強的抗菌活性，尤其是對諸如曲霉和白念珠菌等呈現上升趨勢的真菌具有獨特的療效，是目前臨床治療深部真菌感染的“王牌抗生素”。因此，國外大制藥公司經過30多年的研究開發，已經成功地上市了三個芬凈類抗真菌藥物，即卡帕芬凈、米卡芬凈和阿尼芬凈。

阿尼芬凈(Anidulafungin)是第三代棘白菌素類的半合成抗真菌藥物，由美國的Vicuron制藥公司研發，后被輝瑞公司收購。與傳統的作用于真菌漿膜中麥角固醇的抗真菌藥不同，阿尼芬凈是一種1，3-β-D-葡聚糖合成抑制劑。1，3-β-D-葡聚糖是真菌細胞壁的重要組成部分，阿尼芬凈通過抑制真菌1，3-β-D-葡聚糖合成酶，使真菌細胞壁中1，3-β-D-葡聚糖含量減少，造成細胞壁的完整性被破壞，細胞內滲透壓不穩定，最終導致真菌細胞溶解死亡。由于哺乳動物細胞沒有細胞壁，缺乏1，3-β-D-葡聚糖合成酶，故阿尼芬凈對真菌具有較高的特異性，一般不會產生類似兩性霉素B那樣的細胞毒性，并與現有的抗真菌劑之間不存在交叉耐藥性。

阿尼芬凈通過對棘白菌素B(Echinocandin B)進行側鏈改造獲得。對棘白菌素B的側鏈進行酶解，然后連接新的側鏈。棘白菌素B可由Aspergillus rugulovalvus(異稱Aspergillus rugulosus)發酵產生。由于棘白菌素B的發酵產量很低，進而影響了阿尼芬凈的產量。因此，本領域迫切需要一種棘白菌素B產量高、遺傳性狀穩定的高產菌株。

發明內容

本申請的發明人以Aspergillus rugulovalvus ATCC 58398為出發菌株，經隨機誘變后篩選到一株棘白菌素B產生菌株，并將其進行了保藏，保藏號為CGMCC No.5413。

因此，本發明的第一個目的在于，提供一種Aspergillus rugulovalvus，其保藏號為CGMCC No.5413。

本發明的第二個目的在于，提供所述Aspergillus rugulovalvus CGMCCNo.5413用于生產棘白菌素B的應用。

本發明的第三個目的在于，提供一種棘白菌素B的生產方法。

本發明所需要解決的技術問題，可以通過以下技術方案來實現：

作為本發明的第一方面，一種棘白菌素B產生菌株為Aspergillus rugulovalvus ATCC 58398菌株的突變菌株，該菌株保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號為CGMCC No.5413，保藏日期2011年10月28日。

作為本發明的第二方面，所述的菌株用于生產棘白菌素B的應用。

作為本發明的第三方面，一種棘白菌素B的生產方法，其特征在于，通過發酵權利要求1所述的Aspergillus rugulovalvus CGMCC No.5413獲得棘白菌素B。

所述發酵的條件如下：

發酵培養基(wt)：麥芽糖6.0％，糊精2.0％，棉籽粉3.0％，酵母粉1.5％，油0.2％，谷氨酸0.3％，KH₂PO₄0.1％；

發酵液培養溫度25℃，培養7天；搖瓶轉速220rpm/min。

經過發酵獲得的發酵液中棘白菌素B的含量達到800mg/l左右。