[發(fā)明專利]海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210040141.7
• 申請日: 2012-02-21
• 公開（公告）號: CN102559683A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋林生;楊傳燕;王玲玲;邱麗梅;張峘
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)、基因工程領(lǐng)域，具體的說是一種海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

近年來，我國淺海貝養(yǎng)殖有了長足發(fā)展，但隨著氣候變暖，夏季高溫成為制約水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的主要環(huán)境因素。生物體受到熱激脅迫(高于正常生長溫度5℃以上的溫度)時，能迅速誘導(dǎo)熱休克蛋白的合成，它最早是Ritossa于1962年在果蠅中首先發(fā)現(xiàn)的。而且除溫度外，許多損傷因素、應(yīng)激刺激(如缺氧、重金屬離子、病毒感染、自由基等)都可以誘導(dǎo)熱激反應(yīng)，合成的熱休克蛋白(HSPs)在細胞穩(wěn)態(tài)的重建中起重要作用。熱休克蛋白70(HSP70)家族是熱休克蛋白超家族的重要成員，除了具有分子伴侶的功能以外，在消除重金屬污染對機體造成的損傷，調(diào)節(jié)受體數(shù)量，調(diào)理細胞凋亡，促進抗原提呈，參與機體的免疫反應(yīng)等方面都具有重要的作用。

真核啟動子作為在真核細胞中啟動基因轉(zhuǎn)錄的必需元件，是真核表達載體中一個關(guān)鍵組成部分，決定了目標(biāo)基因的表達效果，不同類型啟動子活性不同。啟動子按其作用方式和功能可分為三類：組成型啟動子、誘導(dǎo)型啟動子、組織特異型啟動子。其中，誘導(dǎo)型啟動子可根據(jù)需要在生物體特定的發(fā)育階段、組織器官或生長環(huán)境下，快速誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄，如熱誘導(dǎo)表達基因啟動子(HSP啟動子)等。目前已有許多熱誘導(dǎo)型啟動子被成功應(yīng)用于植物基因工程領(lǐng)域，例如將大豆熱激蛋白GmHSP17.3B啟動子與gus融合，轉(zhuǎn)入苔蘚。通過控制熱激溫度來調(diào)節(jié)GUS的表達量；將向日葵的HaHSP17.7G4基因的啟動子與gus連接，轉(zhuǎn)化煙草，發(fā)現(xiàn)其對高溫(42℃)、脫落酸都有應(yīng)答，在胚胎形成過程中也有積累。在水生動物中，目前還沒有熱誘導(dǎo)型啟動子的相關(guān)研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子及其應(yīng)用。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子，海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子核苷酸序列為序列表SEQ?ID?NO.1所示。

海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子核苷酸序列為序列表SEQ?ID?NO.1所示序列具有＞75％同源性，且能夠控制下游基因轉(zhuǎn)錄的DNA分子。

海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子核苷酸序列為序列表SEQ?ID?NO.1所示序列的片段、遺傳變體或缺失體，且能夠控制下游基因轉(zhuǎn)錄的DNA分子。

海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子的應(yīng)用，所述海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子在調(diào)控海灣扇貝基因表達中的應(yīng)用。所述基因為下游基因。

本發(fā)明所述含有海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子的重組載體，包含有本發(fā)明所述的海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子，以及由該啟動子控制的目標(biāo)蛋白基因。

本發(fā)明所述含有海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子重組載體的宿主細胞，是通過在宿主細胞中轉(zhuǎn)染含有海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子的重組載體獲得的，重組的宿主細胞中含有本發(fā)明所述的含有海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子的重組載體，并能夠表達由海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子控制的目標(biāo)蛋白基因。本發(fā)明所述宿主細胞包括且不僅限于Hela細胞。

本發(fā)明的突出優(yōu)點如下：本發(fā)明克隆的海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子是典型的熱誘導(dǎo)型啟動子，具有強啟動子活性。實驗結(jié)果表明，海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子可以在Hela細胞系中高效啟動下游基因表達，可以廣泛用于基因工程重組載體的構(gòu)建。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例提供的RT-PCR檢測熱脅迫后海灣扇貝熱休克蛋白70表達情況柱狀圖(其中柱狀圖上方星號標(biāo)記表示與b?l?ank組顯著差異(**：P＜0.01，N＝5))。

圖2為本發(fā)明實施例提供的海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子活性分析圖(其中將包含有海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子的重組載體轉(zhuǎn)染到Hela細胞系中，檢測熱激前后由海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子驅(qū)動的熒光素酶活性變化。pGL?3-control為陽性對照，pGL?3-basic為陰性對照。)。

具體實施方式

本發(fā)明所述海灣扇貝熱休克蛋白70基因啟動子，是具有下述任一特征的DNA分子：

1、由SEQ?ID?NO.1堿基對1-1540定義的DNA分子；

2、由SEQ?ID?NO.1堿基對1-1540定義的序列具有＞75％同源性，且能夠控制下游基因轉(zhuǎn)錄的DNA分子；

3、是SEQ?ID?NO.1的片段、遺傳變體或缺失體，且能夠控制下游基因轉(zhuǎn)錄的DNA分子。