[發(fā)明專利]藥用真菌瓦尼木層孔菌多糖的提取純化方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210037925.4
• 申請日: 2012-02-20
• 公開（公告）號: CN103254321A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何茂群;婁紅祥;李偉;曹桂東;仝加;朱敘偉;劉德杰;楊文寧;李雪改;吳煥軍
• 申請（專利權(quán)）人: 瑞陽制藥有限公司;山東大學(xué)
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P35/00;A61P1/16;A61P17/18;A61P3/10;A61P31/04
• 代理公司: 青島發(fā)思特專利商標(biāo)代理有限公司 37212
• 代理人: 馬俊榮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種瓦尼木層孔菌多糖的提取純化方法，屬于天然產(chǎn)物有效成分的提取領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

瓦尼木層孔菌(Phellinus?vaninii?Ljub)，又名楊黃，屬于擔(dān)子菌綱非褶菌目銹革孔菌科木層孔菌屬真菌。瓦尼木層孔菌在我國主要分布于吉林的長白山和黑龍江的小興安嶺地區(qū)，多生長在楊樹活立木或倒木上，是楊樹特有的一種寄生菌。?

瓦尼木層孔菌在有些地區(qū)也被當(dāng)作桑黃(鮑式層孔菌(Phellinus?baumii)、裂蹄層孔菌(Phellinus?linteus)、火木層孔菌(Phellinus?igniarius))入藥。由于過度開發(fā)采集，野生桑黃資源迅速枯竭，急需尋找新來源或替代品，瓦尼木層孔菌與桑黃有相近或相似的藥理活性與功效，被認(rèn)為是未來能夠代替桑黃藥用的品種來源。?

早在1968年，日本科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，野生桑黃子實(shí)體的提取物對小鼠肉瘤S180腫瘤細(xì)胞有直接抑制作用，其抑制率為96.7％，并發(fā)現(xiàn)桑黃中發(fā)揮抗癌作用的物質(zhì)為多糖。近幾十年來，日本、韓國等對桑黃的藥用價(jià)值進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)桑黃抗癌效果比靈芝、加里斯茸、PL-2、PL-5還好，是目前國際公認(rèn)的生物抗癌領(lǐng)域中藥效最好的藥用真菌之一。大量的研究結(jié)果表明桑黃多糖能有效抑制癌細(xì)胞的生長并防止其擴(kuò)散轉(zhuǎn)移，這主要是通過細(xì)胞調(diào)節(jié)和體液免疫而起作用的。另外，國內(nèi)外研究表明，桑黃還具有肝纖維化抑制、抗氧化、抗血管生成、降血糖、抗菌消炎等藥理作用。?

目前，關(guān)于瓦尼木層孔菌的研究報(bào)道比較少，中國知網(wǎng)上僅有20余篇相關(guān)文獻(xiàn)，文獻(xiàn)顯示其化學(xué)成分主要是多糖類、黃酮類、多酚類和甾醇類化合物，具有抗腫瘤、抗氧化等作用。為了開發(fā)瓦尼木層孔菌，需要對其進(jìn)行進(jìn)一步的研究。為提高藥效、富集純化有效部位，需要一種能夠?qū)ν吣崮緦涌拙亩嗵遣课贿M(jìn)行進(jìn)富集的制備工藝。?

發(fā)明內(nèi)容

根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提供一種瓦尼木層孔菌多糖的提取純化方法，提取分離純化并最終得到較高純度的瓦尼木層孔菌多糖，有效地富集瓦尼木層孔菌的多糖有效成分，降低提取物中的雜質(zhì)含量。?

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：提供一種藥用真菌瓦尼木層孔菌多糖的提取純化方法，其特征在于包括以下步驟：?

(1)取瓦尼木層孔菌原料，挑選剪除附著的木屑，將原料烘干，粉碎，過篩；?

(2)用乙醇水溶液浸提脫脂2～3次，棄去浸提液，剩余原料自然晾干或烘干；?

(3)將干燥后的原料用熱水提取三次，濾液用紗布過濾，合并濾液后減壓濃縮，放置冷卻至室溫；?

(4)向冷卻后的濃縮液中加乙醇，攪拌均勻，冷藏醇沉；?

(5)將醇沉物離心，用乙醇洗滌沉淀，沉降物烘干后即得瓦尼木層孔菌粗多糖。?

所述步驟(1)中，粉碎后的原料過5～30目篩。?

所述步驟(2)中，脫脂所用乙醇濃度為70～100％，瓦尼木層孔菌原料與乙醇的比例為1∶1～50，浸提時(shí)間為1～24小時(shí)。?

所述步驟(3)中，瓦尼木層孔菌原料與水的比例為1∶1～50，提取溫度為70～100℃，提取時(shí)間為1～5小時(shí)，濃縮后的體積與提取液體積比為1∶5～20。?

所述步驟(4)中，乙醇的濃度為70～90％，冷藏溫度為0～5℃，醇沉?xí)r間為1～72小時(shí)。?

所述步驟(5)中，離心時(shí)間為5～30分鐘，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為1000～10000r/min，洗滌次數(shù)為1～3次。?

本發(fā)明所用的瓦尼木層孔菌(Phellinus?vaninii?Ljub)采集自遼寧省丹東市，標(biāo)本保存于山東大學(xué)藥學(xué)院天然藥物化學(xué)標(biāo)本室，編號為PV20100901。?

優(yōu)選的一種瓦尼木層孔菌多糖的提取純化方法，取瓦尼木層孔菌原料，挑選剪除附著的木屑，將原料烘干，粉碎，過5～30目篩；用70～100％濃度的乙醇水溶液浸提脫脂2～3次，浸提時(shí)間為1～24小時(shí)，料液比為1∶1～50，棄去浸提液，剩余原料自然晾干或烘干；將干燥后的原料用熱水提取三次，料液比為1∶1～50，提取溫度為70～100℃，提取時(shí)間為1～5小時(shí)，濾液用細(xì)紗布過濾，合并濾液后減壓濃縮至適當(dāng)體積，濃縮后的體積與提取液體積比為1∶5～20，放置冷卻至室溫；向冷卻后的濃縮液中加乙醇至濃度為70～90％，攪拌均勻，冷藏醇沉，冷藏溫度為0～5℃，醇沉?xí)r間為1～72小時(shí)；將醇沉物離心5～30分鐘，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為1000～10000r/min，用乙醇洗滌沉淀1～3次，沉降物烘干后即得瓦尼木層孔菌粗多糖。?