[發明專利]麥角乙二胺檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201210034598.7
• 申請日: 2012-02-16
• 公開（公告）號: CN102937647A
• 公開（公告）日: 2013-02-20
• 發明（設計）人: 陳立柱;楊利
• 申請（專利權）人: 北京寶瑞源科技孵化有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物學免疫方法的測定技術領域，特別是涉及一種利用膠體金免疫層析技術制作的一種麥角乙二胺檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

麥角乙二胺(LSD)是已知藥力最強的致幻劑，極易為人體吸收。服用后會產生幻視、幻聽和幻覺，出現驚惶失措、思想迷亂、疑神疑鬼、焦慮不安、行為失控和完全無助的精神錯亂的癥狀。同時會導致失去方向感、辨別距離和時間的能力，因而導致身體嚴懲受傷和死亡。

目前有關麥角乙二胺的檢測方法有很多，例如：高效液相色譜法(HPLC)、薄層色譜法(TLC)、氣相色譜法(GC)、氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS)等方法，但是存在需要昂貴的儀器設備，對檢測材料的要求高，需要提純處理等限制。因此研究具有快速、便攜等優點的檢測方法具有現實意義。本發明介紹了一種以膠體金免疫層析法快速檢測麥角乙二胺的檢測試劑盒及其制備方法，該方法具有簡單、快速，無需任何儀器設備，經濟實用等特點，適用于快速定性檢測樣本中是否含有麥角乙二胺。

發明內容

本發明的目的在于提供一種便攜、快速，適合于現場檢測麥角乙二胺的檢測試劑盒及其制備方法。

一種用于檢測麥角乙二胺的檢測試劑盒，包括樣品墊(1)、膠體金墊(2)、硝酸纖維素膜(3)、吸樣墊(4)和PVC支撐板(5)，在PVC支撐板上依次緊密粘附有樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜和吸樣墊。所述樣品墊為玻璃纖維；所述膠體金墊為膠體金標記的麥角乙二胺單克隆抗體聚酯膜；所述硝酸纖維素膜上依次包被有檢測線(T線)和質控線(C線)，其中檢測線(T線)上包被了麥角乙二胺-BSA偶聯抗原，質控線(C線)上包被了羊抗鼠IgG多克隆抗體；所述吸樣墊為吸水紙。

本發明采用納米膠體金技術及抗原抗體特異性反應，應用免疫競爭抑制反應的原理制備而成，通過待檢樣本中含有的麥角乙二胺與硝酸纖維素膜上檢測線(T線)包被的麥角乙二胺-BSA偶聯抗原競爭結合膠體金標記的麥角乙二胺單克隆抗體，通過T線的顯色來判定待檢樣本中是否含有麥角乙二胺。

本發明提供了一種麥角乙二胺檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備麥角乙二胺偶聯抗原

將麥角乙二胺與BSA偶聯，合成麥角乙二胺-BSA偶聯抗原，作為麥角乙二胺偶聯抗原。

(2)制備麥角乙二胺單克隆抗體

采用麥角乙二胺-BSA偶聯抗原為免疫原免疫BALB/C小鼠，通過雜交瘤技術，得到分泌抗麥角乙二胺單克隆抗體的雜交瘤細胞株；以體內誘生腹水法大量制備抗體，使用Protein?G柱進行純化，獲得麥角乙二胺單克隆抗體。

(3)制備膠體金

取90ml純化水于潔凈的圓底燒瓶中，于電磁加熱套中攪拌并加熱，等待沸騰后，加入4ml?1％的氯化金溶液，繼續攪拌1min，迅速加入6ml?1％的檸檬酸三鈉，溶液顏色由淺黃變成黑色最后變成酒紅色，繼續加熱5min，取出冷卻到室溫，常溫避光保存。這樣制成的膠體金顆粒的大小為20-40nm。

(4)制備膠體金墊

取顆粒大小為20-40nm的膠體金溶液，用0.1mol/L?K₂CO₃將膠體金溶液的pH值調至7.0-9.0，室溫放置10分鐘；在上述溶液中加入麥角乙二胺單克隆抗體，使麥角乙二胺單克隆抗體的濃度為20-80μg/ml膠體金，混合均勻后，室溫放置30分鐘；加入10％的BSA溶液使其濃度為10-60μl/ml，混合均勻，室溫放置10分鐘；12000轉離心30分鐘，仔細吸取上清液，棄去，剩余的沉淀用初始膠體金體積的膠體金復溶液溶解；12000轉離心30分鐘，仔細吸取上清液，棄去，剩余的沉淀用30％-100％初始膠體金體積的膠體金復溶液溶解，得到麥角乙二胺單克隆抗體-膠體金標記物；將麥角乙二胺單克隆抗體-膠體金標記物按1mL鋪40-70cm²聚酯膜的比例均勻鋪在聚酯膜上，再置干燥間，在溫度38℃，濕度小于30％的條件下干燥24±2小時，制成膠體金墊。

上述膠體金復溶液為含0.01-0.1％的Tris，1.0-3.0％的蔗糖、0.1-1.0％的BSA的0.02M?pH?7.0-9.0的磷酸鹽緩沖溶液。

(4)包被麥角乙二胺-BSA偶聯抗原、羊抗鼠IgG多克隆抗體