[發(fā)明專利]豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒和豬瘟病毒的RT-PCR檢測(cè)及其專用引物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210034157.7
• 申請(qǐng)日: 2012-02-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102586477A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李云崗;杜蘭榮;張棟;孫圣福;蘭鄒然
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種檢測(cè)病毒的專用引物，包括引物對(duì)A和引物對(duì)B，

所述引物對(duì)A包括引物1和引物2，

所述引物對(duì)B包括引物3和引物4，

所述引物1的核苷酸序列為序列表中的序列1；

所述引物2的核苷酸序列為序列表中的序列2；

所述引物3的核苷酸序列為序列表中的序列3；

所述引物4的核苷酸序列為序列表中的序列4。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述專用引物，其特征在于：所述專用引物由所述引物對(duì)A和所述引物對(duì)B組成，

所述病毒為豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒和豬瘟病毒中的至少一種；所述豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒具體為豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒經(jīng)典株或高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒株。

3.一種檢測(cè)病毒的RT-PCR試劑，由權(quán)利要求1或2所述的專用引物中的所述引物對(duì)A、所述引物對(duì)B、dNTP、RNA酶抑制劑、聚合酶和緩沖液組成。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述RT-PCR試劑，其特征在于：

所述引物對(duì)A中的所述引物1和所述引物2在所述RT-PCR試劑中的終濃度均為0.5μM，所述引物對(duì)B中的所述引物3和所述引物4在所述RT-PCR試劑中的終濃度均為1μM；

所述病毒為豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒和豬瘟病毒中的至少一種；所述豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒具體為豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒經(jīng)典株或高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒株。

5.一種檢測(cè)病毒的試劑盒，包括權(quán)利要求3或4所述RT-PCR試劑；

所述病毒具體為豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒和豬瘟病毒中的至少一種；所述豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒進(jìn)一步具體為豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒經(jīng)典株或高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒株。

6.權(quán)利要求1或2所述專用引物或權(quán)利要求3或4所述RT-PCR試劑或權(quán)利要求5所述試劑盒在檢測(cè)病毒或制備檢測(cè)病毒產(chǎn)品中的應(yīng)用；

所述病毒具體為豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒和豬瘟病毒中的至少一種；所述豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒進(jìn)一步具體為豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒經(jīng)典株或高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒株。

7.一種檢測(cè)或輔助檢測(cè)待測(cè)樣本是否含有病毒的方法，包括如下步驟：

用權(quán)利要求1或2所述專用引物或權(quán)利要求3或4所述RT-PCR試劑或權(quán)利要求5所述試劑盒中的所述引物對(duì)A和所述引物對(duì)B共同對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，得到RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；檢測(cè)RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，

若所述RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小僅為525bp和435bp中的至少一種，則樣本中含有或候選含有豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒；

若所述RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小僅為707bp，則樣本中含有或候選含有豬瘟病毒；

若所述RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小為525bp和435bp中的至少一種與707bp，則樣本中含有或候選含有豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒和豬瘟病毒。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述方法，其特征在于：

若所述RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小僅為525bp，則樣本中含有或候選含有豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒經(jīng)典株；

若所述RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小僅為435bp，則樣本中含有或候選含有高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒；

若所述RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小為525bp和435bp，則樣本中含有或候選含有豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒經(jīng)典株和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒株；

若所述RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小為525bp和707bp，則樣本中含有或候選含有豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒經(jīng)典株和豬瘟病毒；

若所述RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小435bp和707bp，則樣本中含有或候選含有高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒株和豬瘟病毒；

若所述RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小為435bp、525bp和707bp，則樣本中含有或候選含有豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒經(jīng)典株、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒株和豬瘟病毒三種病毒；

所述525bp的RT-PCR產(chǎn)物的核苷酸序列具體為序列表中的序列5；

所述435bp的RT-PCR產(chǎn)物的核苷酸序列具體為序列表中的序列6；

所述707bp的RT-PCR產(chǎn)物的核苷酸序列具體為序列表中的序列7。