[發明專利]HPV18E7單克隆抗體、相關雜交瘤細胞株和應用

有效

• 申請號: 201210033918.7
• 申請日: 2012-02-16
• 公開（公告）號: CN103254307A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 常小迦
• 申請（專利權）人: 艾托金生物醫藥（蘇州）有限公司
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C12N5/20;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 王潔;顧小偉

技術領域

本發明涉及基因工程和免疫學技術領域，更具體地，涉及單克隆抗體技術領域，特別是指一種HPV18E7單克隆抗體、相關雜交瘤細胞株和應用。

背景技術

宮頸癌是女性生殖系統的常見惡性腫瘤，位居女性惡性腫瘤第二位。大量研究發現，人乳頭瘤病毒HPV(human?papilloma?virus)是導致宮頸癌的元兇，還可以引起多種其它腫瘤，包括生殖道、乳腺、消化道及呼吸道癌癥。HPV近年來在我國人群中的傳播有增無減，故宮頸癌預防、治療的研究工作非常重要。

1949年，Sttauss首先在電鏡下于疣體浸出液中觀察到人乳頭瘤病毒(HPV)顆粒。在1976年zur?Hansen提出HPV可能是性傳播致癌因素之后，HPV感染與宮頸癌關系的研究成為腫瘤病毒病因研究的熱門課題。HPV是一種具有種屬特異性的嗜上皮病毒，屬雙鏈閉環的小DNA病毒，包含約8000個堿基對。其中包括6個早期開放讀碼框架，E1，E2，E4-E7共6個基因，負責編碼病毒復制相關蛋白，2個晚期讀碼框架和1個非編碼長控區。在早期開放讀碼框架中，E6和E7基因對細胞生長刺激最為重要，E6、E7編碼的E6、E7蛋白引起宮頸上皮細胞永生化。而晚期讀碼框L1和L2基因分別編碼HPV的主要和次要衣殼蛋白，組裝成HPV的衣殼。

高危亞型HPV的E6，E7蛋白導致正常上皮細胞轉化成癌癥細胞的因果關系已被科學證明。因此，需要提供一種HPV18E7單克隆抗體及分泌HPV18E7單克隆抗體的雜交瘤細胞，該雜交瘤細胞能穩定分泌HPV18E7單克隆抗體，為進一步研究HPV18E7的功能，用于癌癥治療癌癥檢測和的研究奠定基礎。

發明內容

本發明的主要目的就是針對以上存在的問題與不足，提供一種HPV18E7單克隆抗體、相關制備方法、雜交瘤細胞株和應用，該HPV18E7單克隆抗體能特異性檢測HPV18E7，可用于HPV18高危致癌病毒亞型的感染，及宮頸癌早期診斷的特異性檢測。特異性高，反應靈敏，成本低，適于大規模推廣應用。

為了解決上述目的，在本發明的第一方面，提供了一種HPV18E7單克隆抗體，其特點是，所述HPV18E7單克隆抗體是對SEQ?ID?NO：2所示的蛋白能特異性結合的單克隆抗體。

本發明中所述“特異性”是指單克隆抗體對相應抗原或近似抗原物質的識別能力。特異性高，對抗原的識別能力就強。因此，上述的HPV18E7單克隆抗體能夠特異性識別和結合SEQ?ID?NO：2所示的蛋白。SEQ?ID?NO：2所示的蛋白可以直接合成，也可以通過基因工程方法制備。在本發明的一具體實施例中，SEQ?ID?NO：2所示的蛋白可以是由SEQ?ID?NO：1第1至312位核苷酸編碼產生。

制備本發明的單克隆抗體所用的抗原是通過基因工程的方法獲得，利用在原核生物中表達含有編碼本發明的抗原的多核苷酸序列SEQ?ID?NO：1。本領域的技術人員通常熟知適用于表達本發明的抗原的載體。可根據所選用的適當啟動子和待表達的目的基因序列來選擇適當的載體。可使用任何適當的宿主細胞表達本發明的抗原。適當宿主的例子包括：原核細胞如大腸桿菌、芽孢桿菌、鏈霉菌等。轉導、轉化或轉染的方法是本領域已知的，包括，但不限于，病毒感染、氯化鈣轉染法、脂質體轉染法、電穿孔法或微粒轟擊法等。為了活化啟動子、選擇轉化體或擴增所需的基因，可以在適當修飾的常規營養培養基中培養被轉導、轉染或轉化的宿主細胞。培養中所使用的溫度、pH值等培養條件一般都是由所選用的表達特定蛋白質的宿主細胞決定的，并且這些條件都是本領域技術人員熟知的。為了大量獲得重組蛋白，可以采用誘導型啟動子，并利用誘導物誘導基因的表達。實質上，“誘導物”可以是任何能誘導宿主中基因表達的物質，可以是化學物質或環境刺激。

較佳地，所述單克隆抗體是采用SEQ?ID?NO：2所示的蛋白與已知標簽形成的融合蛋白作為抗原免疫動物得到的。

更佳地，所述單克隆抗體是采用所述融合蛋白作為抗原免疫小鼠得到的。

更進一步地，所述單克隆抗體對HPV18E7有特異性。

較佳地，所述單克隆抗體由保藏號為CGMCC?No.5714的雜交瘤細胞株產生。

在本發明的第二方面，提供了一種雜交瘤細胞株，其特點是，所述雜交瘤細胞株用于產生上述的HPV18E7單克隆抗體，所述雜交瘤細胞株的保藏號為CGMCC?No.5714。