[發明專利]一種寬葉香蒲根尖誘導愈傷組織并分化成苗的方法

有效

• 申請號: 201210033642.2
• 申請日: 2012-02-15
• 公開（公告）號: CN102577954A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 楊柳燕;杜宏偉;武俊;劉露;肖琳;呂志剛;許超;張全興
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

1.一種寬葉香蒲根尖誘導愈傷組織并分化成苗的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

(1)將寬葉香蒲的種子干燥、消毒、發芽生根；

(2)對步驟(1)生根后的根尖誘導愈傷組織并分化成苗：

(2a)從步驟(1)中生根后的苗根上獲取2-3mm的根尖，轉接到愈傷組織誘導培養基上無光條件下培養9周；所述的愈傷組織誘導培養基是外加2g·L^-1植物凝膠、30g·L^-1蔗糖和2.5～20μM毒莠定的MS培養基；

(2b)將步驟(2a)得到的愈傷組織轉接到愈傷組織分化培養基上，在25℃、連續光照、光照強度是30μmol·m^-2·s^-1的條件下分化培養4周；所述的愈傷組織分化培養基為添加了2.5～5mg·L^-1細胞分裂素、0～2.5mg·L^-1激動素、0～0.05mg·L^-1萘乙酸和0～0.05mg·L^-1吲哚乙酸的MS培養基；

(2c)將步驟(2b)分化培養后得到的苗轉接到生根培養基上培養4周；所述的生根培養基為添加了2mg·L^-1IBA、2g·L^-1植物凝膠和30g·L^-1蔗糖的1/4MS基本培養基；

(2d)將步驟(2c)生根培養后的苗轉移到含有花肥的小花盆中，將苗置于25℃的溫室中生長，在第一周的時候苗的上方要覆蓋一層塑料薄膜，防止水分的蒸發，溫室中的光照強度約為230μmol·m^-2·s^-1，3天澆水一次，培養40天后轉移到更大的花盆中，花盆中含有花肥并保持3～5cm深度的水。

2.根據權利要求1所述的寬葉香蒲根尖誘導愈傷組織并分化成苗的方法，其特征在于，步驟(1)中所述的干燥條件為42℃下干燥24小時。

3.根據權利要求1所述的寬葉香蒲根尖誘導愈傷組織并分化成苗的方法，其特征在于，步驟(1)中所述的消毒，包括如下步驟：

(1a)將種子用滅過菌的蒸餾水浸泡兩次，每次浸泡5min，倒干水；

(1b)步驟(1a)處理后的種子用75％(v/v)的乙醇溶液浸泡90秒，傾去乙醇溶液；

(1c)步驟(1b)處理后的種子加入2.5％(w/w)的次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘，在消毒時不斷搖晃，重復一次，傾去次氯酸鈉溶液；

(1d)步驟(1c)處理后的種子用無菌水浸泡3次，每次浸泡5分鐘，倒掉無菌水。

4.根據權利要求1所述的寬葉香蒲根尖誘導愈傷組織并分化成苗的方法，其特征在于，步驟(1)中所述的發芽生根，將種子轉移到添加了30g?L^-1的蔗糖、pH5.8的液體MS培養液中，置于25℃連續光照下2天發芽，然后將發芽的種子轉接到生根培養基中生根培養5～7天。

5.根據權利要求4所述的寬葉香蒲根尖誘導愈傷組織并分化成苗的方法，其特征在于，所述的生根培養基為添加了2mg·L^-1IBA、2g·L^-1植物凝膠和30g·L^-1蔗糖的1/4MS基本培養基。

6.根據權利要求4所述的寬葉香蒲根尖誘導愈傷組織并分化成苗的方法，其特征在于，生根后的苗的繼代培養條件為將生根后的苗轉接到固體MS培養基，培養3-5周。