[發明專利]一種慢性乙型病毒性肝炎相關基因IFNA2的新突變蛋白、編碼基因及其應用

有效

• 申請號: 201210031358.1
• 申請日: 2012-02-13
• 公開（公告）號: CN102584956A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 王一鳴;黃瑋俊;彭亮;趙強;李奇斌;裴元元;袁萍;高志良
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C07K14/02
• 分類號: C07K14/02;C12N15/51;G01N33/68;G01N33/576;C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

技術領域

本發明涉及生物工程及醫學技術領域，具體涉及一種慢性乙型病毒性肝炎相關基因IFNA2的新突變蛋白、編碼基因及其應用。

背景技術

慢性乙型病毒性肝炎（慢性乙肝）是由乙型肝炎病毒（HBV）感染而引起的以肝臟損害為主要表現的傳染性疾病，是關系到我國乃至全球公共衛生的重大疾病。宿主的遺傳背景在其易感性及免疫應答中起重要作用。而人群對乙肝免疫力的高低存在明顯的個體差異。

中國專利200810004159.5公開了一種與肝細胞癌相關的乙型肝炎病毒基因組標志物以及預測HBV感染個體發展成肝細胞癌(HCC)的遺傳素因的試劑盒。該試劑盒包括一種或更多種探針，當其與HBV基因組接觸時，如果所述基因組為IFNA2基因型、且包括至少一種對應于某段核苷酸序列上的核苷酸（170C;和/或2170G2;和/或2441C;和/或799G）時會選擇性地與所述基因組雜交。

發明內容

本發明的目的在于提供一種慢性乙型病毒性肝炎相關基因IFNA2的新突變蛋白。

本發明的另一目的是提供上述慢性乙型病毒性肝炎相關基因IFNA2的新突變蛋白的編碼基因。

本發明的又一目的是提供上述慢性乙型病毒性肝炎相關基因IFNA2的新突變蛋白、該突變蛋白的編碼基因的應用。

本發明通過以下技術方案實現上述目的：

一種慢性乙型病毒性肝炎相關基因IFNA2的新突變蛋白，是在慢性乙型病毒性肝炎相關基因IFNA2蛋白的氨基酸序列第120位丙氨酸Ala突變為蘇氨酸Thr，本發明中用p.Ala120Thr表示。

上述慢性乙型病毒性肝炎相關基因IFNA2的新突變蛋白，氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

上述慢性乙型病毒性肝炎相關基因IFNA2的新突變蛋白的編碼基因。該編碼基因的核苷酸序列優選如SEQ?ID?NO:2所示。

慢性乙型病毒性肝炎相關基因IFNA2的新突變蛋白在制備慢性乙型病毒性肝炎的檢測試劑中的應用。

慢性乙型病毒性肝炎相關基因IFNA2的新突變蛋白的編碼基因在制備慢性乙型病毒性肝炎的檢測試劑中的應用。

一種慢性乙型病毒性肝炎檢測試劑盒，由以下成分組成：核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4所示的引物，PCR反應液，PCR產物純化盒和測序反應液；

所述PCR反應液為溶解了Tag?DNA聚合酶、dNTPs、鎂離子（如MgCl₂）、PCR反應緩沖液（如10×Taq?Buffer），以上試劑均可直接購買相應商品，如（10mM）dNTPs購自上海生工生物工程技術服務有限公司；Tag?DNA聚合酶及其配套的10×Taq?Buffer、MgCl₂購自Fermentas公司。各試劑的用量及濃度均為本領域常規值，如1u/μL?Tag?DNA聚合酶1μL、2mmol/L?的dNTP（即濃度均為2mmol/L?的4種dNTP的混合物）3μL、25mmol/L?MgCl_2?3μL、10×Taq?Buffer（內含(NH₄)₂SO₄）3μL、滅菌ddH₂O?17μL。

所述PCR產物純化盒為純化PCR產物的溶液和DNA吸附柱Labell；所述純化PCR產物的溶液為：1u/μL蝦堿性磷酸酶（SAP，可購于Fermentas公司）0.6μL、20u/μL外切酶（Exo?I，可購于Fermentas公司）0.15μL和滅菌ddH₂O?1.25-1.75μL，或按上述比例配制的其他體積的混合液。純化PCR產物的溶液優選2-2.5μL。

所述測序反應液為BigDye（購自ABI公司）和5×Sequence?buffer（購自ABI公司）的混合液，BigDye和5×Sequence?buffer的體積比優選為1:2，如1μLBigDye與2μL5×Sequence?buffer混合。

上述慢性乙型病毒性肝炎檢測試劑盒，優選核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4所示的引物濃度分別為3.2μmol/L。