[發明專利]豬繁殖與呼吸綜合征病毒的CTL表位多肽及其應用

無效

• 申請號: 201210030549.6
• 申請日: 2012-02-10
• 公開（公告）號: CN103242427A
• 公開（公告）日: 2013-08-14
• 發明（設計）人: 夏春;潘孝成
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12N15/40;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N15/86;C12N5/0783;A61K48/00;A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及豬繁殖與呼吸綜合征病毒的CTL表位多肽及其應用。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine?Reproductive?and?Respiratory?Syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種豬高度接觸性傳染病。不同品種、年齡和性別的豬均可感染，以妊娠母豬和1月齡以內的仔豬最易感。PRRS以母豬的流產、死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔豬的呼吸困難、敗血癥、高死亡率等為主要特征。1987年美國首先報道了該病的發生，隨后短短幾年時間，迅速遍及全球各養豬業發達的國家和地區。最初，由于人們不能確定其病因，故稱其為“豬神秘病”(swine?Mystery?disease，SMD)、“豬不育和呼吸道綜合征”(Swine?infertility?and?respiratory?syndrome，SIRS)和“豬藍耳病”(Blue?ear?disease)等。1991年，荷蘭中央獸醫研究所研究人員用豬肺泡巨噬細胞首次分離到病原，并命名為Lelystadvirus(PRRSV歐洲型代表株)。1992年美國研究人員用CL2621細胞也分離到PRRSV美洲型代表株(VR2332)。1992年，國際獸醫局(OIE)將其統一命名為“豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)”，并在同年5月將該病列為B類傳染病。目前，PRRS在幾乎所有養豬國家中存在，成為危害養豬業最重要的疫病之一，嚴重威脅著全球養豬業和世界公共衛生。

1996年，郭寶清等首次從北京豬流產胎兒體內分離到PRRSV，從而證實該病在我國存在。不久，我國其他地方也陸續發現PRRS，該病的流行嚴重危害了我國養豬業的健康有序發展。特別是2006年-2007年，在我國爆發了高致病性豬繁殖與呼吸綜合征(Highly?Pahogenic?Porcine?Reproductive?and?Respiratory?Syndrome，HP-PRRS)，此次疫情給我國的養豬業帶來了前所未有的沖擊。由此，我國農業部于2008年12月11日公布的動物疫病名錄中將HP-PRRS劃為一類動物疫病。目前使用的疫苗(弱毒疫苗和滅活疫苗)雖然可一定程度地控制PRRS的流行與發生，但難以達到有效控制該病。我們認為對于PRRS這類病毒性疫病，只有在研究清楚其發病機制與免疫機理的基礎上，才能更加有效地開展預防與治療。但是，迄今為止，對于PRRS的免疫機制尚缺乏系統的了解，特別是在豬細胞毒性T淋巴細胞(CTL)特異性細胞免疫研究領域。

豬細胞毒性T淋巴細胞通過識別主要組織相容性I(MHC?I，豬稱為SLA-I)類分子與結合抗原表位多肽的復合物而殺傷靶細胞。CTL是機體是清除病毒、控制病毒復制和擴散的主要機制之一。目前的研究已經證實，細胞性免疫應答和體液免疫應答對于清除PRRSV都十分重要，近期的研究顯示PRRSV在淋巴結等的病毒量和CTL呈負相關，這表明在清除機體PRRSV感染方面，特異性CTL免疫應答起著更重要的作用。

PRRSV?CTL表位是指PRRSV多肽經抗原遞呈細胞(APC)加工后結合于SLA-I類分子，再表達于APC細胞表面，被CTL細胞的T細胞受體(TCR)特異性識別，從而引起豬CTL免疫應答的多肽(為8-10個氨基酸殘基的短肽)。因此，鑒定PRRSVCTL表位對于研究PRRSV感染的發病機制、免疫機理以及研制多肽疫苗等分子疫苗具有重要的意義。

目前，用于鑒定豬CTL表位的方法有4種以上，主要包括有限稀釋法(Limiting?dilution?analysis，LDA)、⁵¹Cr釋放法、細胞內細胞因子染色法(Intracellar?Cytokine?Staining，ICS)和酶聯免疫斑點法(enzyme-link?immunospot?assay，ELISPOT)等。但這些方法十分模糊，均未涉及豬種屬SLA-I等位基因的限制性。豬經典SLA-I具有3個基因座，即SLA-1、SLA-2和SLA-3，因此，要鑒定某一SLA-I等位基因的PRRSVCTL表位以及解析其在抗PRRSV免疫中的作用，目前還是世界范圍內的難題。

發明內容

本發明的目的是提供一種多肽及其應用，該多肽能與豬SLA-I分子結合。

本發明所提供的多肽，名稱為NSP9_-TMP，來源于豬繁殖與呼吸綜合征病毒，其氨基酸序列為序列表中序列1所示。

編碼所述多肽NSP9_-TMP的核酸分子也屬于本發明的保護范圍。