[發明專利]禽流感病毒H5N1亞型限制性CTL表位多肽及其應用

有效

• 申請號: 201210030535.4
• 申請日: 2012-02-10
• 公開（公告）號: CN103242426A
• 公開（公告）日: 2013-08-14
• 發明（設計）人: 夏春;李曉迎;潘孝成
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12N15/44;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N15/86;C12N5/0783;A61K39/145;A61K48/00;A61P31/16
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及禽流感病毒H5N1亞型限制性CTL表位多肽及其應用。

背景技術

流感病毒(Influenza?virus)屬正粘病毒科，為分節段RNA病毒，最早是在1933年由Wilson?Smith發現的。流感病毒的RNA由8個節段組成，共編碼11個蛋白：聚合酶蛋白(PB1、PB2、PA)、核蛋白(NP)、血凝素(HA)、神經氨酸酶(NA)、基質蛋白(M1、M2)、非結構蛋白(NS)及兩個新發現的蛋白PB1-F2和PB1N40。依據血凝素HA和神經氨酸酶NA抗原性的不同，流感病毒共有16個H亞型(H1-16)和9個N亞型(N1-9)，兩者之間的不同組合形成流感病毒的不同亞型。根據核蛋白抗原性的不同，將流感病毒分為甲、乙、丙三型。甲型流感病毒具有高致病性和高變異性的特點，其中高致病性禽流感病毒(highly?pathogenic?avian?influenza，HPAI)H5N1感染雞后能夠在數小時或幾天內引起雞死亡，致死率高達100％，已在世界范圍內引起了比較嚴重的經濟損失，被世界動物衛生組織列為A類動物疫病。1997年首次報道HPAI?H5N1感染人并導致死亡的病例，共有18人被感染，其中6人死亡。2003年至今，世界范圍內已有超過400人感染HPAI?H5N1，致死率達到60％。目前，在禽類養殖過程中普遍使用的為禽流感病毒滅活疫苗，通過誘導機體產生針對病毒表面蛋白的抗體發揮免疫保護作用，但高致病性禽流感病毒具有高變異性的特征，滅活疫苗對新型毒株的流行缺乏有效的免疫保護，且新疫苗的研制往往滯后于疾病的流行。

細胞毒性T淋巴細胞(Cytotoxic?T?lymphocytes，CTL)介導的特異性細胞免疫應答在機體抗病毒和抑制腫瘤的過程中起著關鍵作用。病毒感染細胞后，內源性病毒蛋白在被感染細胞內經過一系列酶解過程，降解為8-11個氨基酸的多肽，再與相應的主要組織相容性復合體(Major?histocompatibility?complex，MHC)I類分子抗原多肽結合槽結合，形成MHC?I-抗原肽復合體，并呈遞于感染細胞表面。MHC?I-抗原肽復合體(pMHCI)被表達于T細胞表面的受體(T?cell?receptor，TCR)識別并與之結合。TCR與pMHC?I復合體之間的相互作用能夠誘導CD8+T細胞活化、增殖為CTL，釋放穿孔素和顆粒酶，殺傷被病毒感染的靶細胞或腫瘤細胞。研究表明，禽流感病毒感染5-7天時，CTL效應細胞能夠遷移至被感染動物的肺部，并有效清除病毒，說明特異性CTL免疫應答在抗禽流感病毒感染過程中起重要作用。

流感病毒內部蛋白(如PB1、PA、NP和M蛋白等)與病毒的復制和轉錄等相關，在病毒變異過程中相對保守，其上的CTL表位可在不同毒株間產生交叉免疫保護作用。通過對流感病毒CTL表位的鑒定，篩選出相對保守的CTL表位，為多肽疫苗的研究提供重要數據。目前，流感病毒CTL表位研究最多的是人和鼠，已鑒定出9條對鼠具有免疫保護作用的流感病毒CTL表位。迄今為止，尚未報道對雞具有免疫保護作用的禽流感病毒CTL表位。

MHC?I/抗原肽復合體是激活特異性CTL免疫應答的關鍵因素。雞MHC基因位于第16號染色體，基因結構簡單且致密，只有一個MHC?I類分子基因座BF，在BF基因中只有BF2基因顯性表達，在抗病毒免疫反應中發揮限制性結合和遞呈抗原表位的作用。研究表明，雞BF2基因與多種禽類病毒病的抗性或易感性有關。以雞為宿主篩選禽流感病毒CTL表位，則會為禽流感病毒多肽疫苗的研究和抗病品系的篩選提供依據。

發明內容

本發明的目的是提供一種多肽及其應用。

本發明所提供的多肽為禽流感病毒H5N1亞型限制性CTL表位多肽，其名稱為P1，氨基酸序列如序列表中序列1所示。

編碼所述禽流感病毒H5N1亞型的限制性CTL表位多肽的核酸分子也屬于本發明的保護范圍。

本發明的核酸分子可以是RNA形式(例如mRNA、hnRNA、tRNA或任意其它形式)，也可以是DNA形式(包括但不限于通過克隆或合成產生，或其任意組合而產生的cDNA和基因組DNA)。DNA可以是三鏈、雙鏈或單鏈，或其任意組合。DNA或RNA的至少一條鏈的任意部分可以是編碼鏈，也稱作有義鏈，或可以是非編碼鏈，也稱作反義鏈。

編碼所述禽流感病毒H5N1亞型的限制性CTL表位多肽的核酸分子具體可為序列表中序列2所示的雙鏈DNA分子。