[發明專利]歐洲型舞毒蛾的實時熒光PCR檢測方法及檢測用引物和探針

有效

• 申請號: 201210030281.6
• 申請日: 2012-02-10
• 公開（公告）號: CN102534024A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 朱雅君;林瑤;葉軍;易建平;周國梁
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 王函

1.一種歐洲型舞毒蛾的實時熒光PCR檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)設計引物和探針；

該引物的序列為：

上游引物EU-F：5’-AACTTCAGGATGTCCGAAAAATCA-3’(SEQ?ID?NO.1)；

下游引物EU-R：5’-ACAGCTTTCCTTCTACTTTTATCTTTACCT-3’(SEQ?ID?NO.2)；

該探針的序列為：

歐洲型舞毒蛾探針EU-MGB：FTGGATCTCCTCCTCCTP(SEQ?ID?NO.3)或其互補鏈；

(2)提取歐洲型舞毒蛾DNA；

(3)采用步驟(1)設計的引物和探針進行實時熒光PCR檢測。

2.如權利要求1所述的歐洲型舞毒蛾的實時熒光PCR檢測方法，其特征在于，步驟(2)具體為：取歐洲型舞毒蛾單頭蟲樣放入研缽，加液氮磨成粉末狀，用試劑盒提取樣品DNA。

3.如權利要求1所述的歐洲型舞毒蛾的實時熒光PCR檢測方法，其特征在于，步驟(3)中，所述實時熒光PCR檢測的反應體系為25μL，包括2×PremixEx?Taq?12.5μL，50×ROX?Reference?Dye0.5μL，步驟(1)設計的上下游引物EU-F/R各1.0μL，EU-MGB探針1.0μL，DNA模板2.0μL，超純水補至25μL。

4.如權利要求1或3所述的歐洲型舞毒蛾的實時熒光PCR檢測方法，其特征在于，步驟(3)中，所述實時熒光PCR檢測的反應程序為：預變性95℃30sec；然后95℃5sec，65℃34sec循環40次。

5.一種用于檢測歐洲型舞毒蛾的引物，其特征在于，其序列為：

上游引物EU-F：5’-AACTTCAGGATGTCCGAAAAATCA-3’(SEQ?ID?NO.1)；

下游引物EU-R：5’-ACAGCTTTCCTTCTACTTTTATCTTTACCT-3’(SEQ?ID?NO.2)。

6.一種用于檢測歐洲型舞毒蛾的探針，其特征在于，其序列為：

EU-MGB：FTGGATCTCCTCCTCCTP(SEQ?ID?NO.3)或其互補鏈。