[發明專利]一種合成利西拉來的方法

有效

• 申請號: 201210030151.2
• 申請日: 2012-02-10
• 公開（公告）號: CN102558338A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 劉飛;付信;劉建;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K14/575
• 分類號: C07K14/575;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 深圳市深佳知識產權代理事務所(普通合伙) 44285
• 代理人: 唐華明

1.一種合成利西拉來的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：取Fmoc保護的氨基樹脂與脫保護劑混合，脫保護后，獲得氨基樹脂；

步驟2：取側鏈保護基團為Boc的Fmoc-Lys-OH與氨基樹脂通過偶聯劑進行縮合，獲得側鏈保護基團為Boc的Fmoc-Lys-氨基樹脂；

步驟3：按照Fmoc固相合成法重復步驟1中脫保護與步驟2中氨基酸與樹脂偶聯的操作，將具有側鏈保護基團的氨基酸從肽鏈碳端到氮端依次偶聯，獲得肽樹脂；所述氨基酸的α-氨基的保護基團為Fmoc；

步驟4：取所述肽樹脂經裂解液裂解，脫除保護基團，經乙醚沉降、離心、干燥后獲得利西拉來粗品，再經純化、轉鹽后，即得；

所述具有保護基團的氨基酸中，賴氨酸的側鏈保護基團為Boc，絲氨酸的側鏈保護基團為tBu，天冬酰胺的側鏈保護基團為Trt，色氨酸的側鏈保護基團為Boc，谷氨酸的側鏈保護基團為OtBu，精氨酸的側鏈保護基團為Pbf，谷氨酰胺的側鏈保護基團為Trt，天冬氨酸的側鏈保護基團為OtBu，蘇氨酸的側鏈保護基團為tBu，組氨酸的側鏈保護基團為Trt。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述純化為，取利西拉來粗品溶于水獲得粗肽溶液，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以pH值為6.5～7.0的磷酸鹽緩沖溶液為A相，乙腈為B相，梯度按照B％：12％～32％，將粗肽溶液進行梯度洗脫。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述轉鹽為，固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠，以質量濃度0.1％～0.2％醋酸水溶液為A相；乙腈為B相，梯度按照B％：5％～35％，進行梯度洗脫。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述脫保護劑為20％哌啶/二甲基甲酰胺溶液。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述偶聯劑為DIC、EDC、HONb、HOBt、HOAt、HATU、HBTU、TBTU、DIPEA、TMP、PYBOP或PYAOP中的一種或兩者以上的混合物。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述裂解液為三氟乙酸、苯甲硫醚、1，2-乙二硫醇、苯甲醚和苯酚的混合溶液。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述裂解液中三氟乙酸、苯甲硫醚、1，2-乙二硫醇、苯甲醚和苯酚的體積比為90～95∶1～4∶1～2∶1～2∶1～2。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述Fmoc保護的氨基樹脂選自Rink?Amide?Resin，Rink?Amide-BHA?Resin，Rink?Amide-MBHA?Resin，Rink?Amide-AM?Resin，Sieber?Resin，Sieber-AM?Resin。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述Fmoc保護的氨基樹脂替代度為0.1～0.5mmol/g。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述脫保護或所述縮合均經過Ninhydrin檢測法檢測。