[發明專利]表達O型口蹄疫病毒空衣殼的重組缺損腺病毒及其應用

有效

• 申請號: 201210030115.6
• 申請日: 2012-02-10
• 公開（公告）號: CN102747092A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 于力;周國輝;楊德成
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/42
• 分類號: C12N15/42;C12N15/861;C12N15/66;A61K48/00;A61K39/135;A61P31/14
• 代理公司: 北京市德權律師事務所 11302
• 代理人: 余光軍

技術領域

本發明涉及重組腺病毒，尤其涉及表達O型口蹄疫病毒空衣殼的重組缺損型腺病毒及其構建方法，本發明進一步涉及該重組缺損腺病毒在制備預防或治療口蹄疫疫苗中的應用，屬于口蹄疫的防治領域。

背景技術

口蹄疫是豬、牛、羊等主要家畜和其它家養、野生偶蹄動物共患的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，易感動物達70多種。口蹄疫的臨床特征是在口腔黏膜、蹄部和乳房皮膚發生水泡。該病傳播途徑多、速度快，曾多次在世界范圍內暴發流行，造成巨大經濟損失。鑒于此，世界動物衛生組織(OIE)將其列為A類傳染病之首。目前，有三分之二的OIE成員國流行FMD，時刻威脅著無FMD國家和地區的家畜安全和畜產品貿易。口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth?Disease?Virus，FMDV)屬于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒屬，其直徑為23納米。目前已知口蹄疫病毒在全世界有七個血清型C、A、O、C、南非1、南非2、南非3和亞洲1型，以及65個以上亞型。O型口蹄疫為全世界流行最廣的一個血清型，中國流行的口蹄疫主要為O、A、C三個血清型及ZB型(云南保山型)。口蹄疫病毒各血清之間沒有交叉保護，即使是同一血清型內的不同亞型之間抗原差異程度也較大，以至于一種亞型的疫苗可能不完全保護同一血清型中其它亞型FMDV的感染，給口蹄疫的防治帶來了極大的困難。疫苗接種是成功預防、控制乃至最終消滅口蹄疫的最有效手段。目前用于防治口蹄疫的疫苗主要有合成肽疫苗和滅活疫苗兩種。

合成肽疫苗是基于病毒的主要抗原位點，利用病毒的主要抗原位點的一部分氨基酸序列合成的具有一定結構的多肽，用于免疫動物誘導中和抗體而達到保護的目的。但是，如果在病毒的主要抗原位點上發生關鍵氨基酸的突變，就會導致合成肽疫苗免疫保護效力的喪失。

口蹄疫滅活疫苗在消滅歐洲的口蹄疫以及控制世界其他國家的口蹄疫過程中發揮了重要作用。但是，滅活疫苗的生產中需要密閉設施來繁殖活病毒，存在活病毒逃逸的潛在風險，世界上一些地區FMD的暴發似乎與滅活疫苗中殘存的活病毒有關。此外，制備FMD滅活疫苗的抗原未經提純，含有病毒非結構蛋白，難于進行感染動物和免疫動物的鑒別診斷。鑒于FMD滅活疫苗的上述缺點，國內外研究者都在尋求一種更加安全有效的口蹄疫疫苗。理想的口蹄疫疫苗具有病毒的完整抗原譜，其免疫原性類似與天然的病毒顆粒，并且沒有病毒的核酸，不能自主復制等特點。如今成為研究熱點的口蹄疫候選疫苗包括蛋白質亞單位疫苗、合成肽疫苗、DNA疫苗和重組病毒等。到目前為止，證明最有效的FMD新型疫苗是人5型復制缺損型腺病毒(Ad5)表達的口蹄疫病毒空衣殼。Ad5作為一個理想的載體的重要原因是因為其免疫動物后不產生針對Ad5的中和抗體，排除了二次免疫的干擾。研制出安全、高效、免疫保護期更長的以腺病毒為載體的口蹄疫病毒空衣殼疫苗，對于口蹄疫的有效預防將具有重要的意義。

發明內容

本發明的目的之一是提供編碼O型口蹄疫病毒空衣殼的亞基因組P1-2A-3C以及該亞基因組P1-2A-3C的突變體；

本發明的目的之二是提供攜帶亞基因組P1-2A-3C或該亞基因組P1-2A-3C的突變體并能夠穩定表達O型口蹄疫病毒空衣殼的重組缺損型腺病毒；

本發明的目的之三是提供一種構建上述重組缺損型腺病毒的方法；

本發明目的之四是將所構建的重組缺損型腺病毒應用于制備成預防或治療口蹄疫病毒空衣殼疫苗或試劑。

為了實現上述目的，本發明首先提供了編碼O型口蹄疫病毒空衣殼的亞基因組P1-2A-3C，其核苷酸序列為SEQ?ID?No.1所示。此外，本發明還提供了該亞基因組P1-2A-3C的突變體，其核苷酸序列為SEQ?ID?No.2所示。