[發(fā)明專利]一種純化固相合成利拉魯肽粗肽的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210029818.7
• 申請日: 2012-02-10
• 公開（公告）號: CN102584982A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設計）人: 覃亮政;潘俊鋒;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/16;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 深圳市深佳知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 44285
• 代理人: 唐華明

1.一種純化固相合成利拉魯肽粗肽的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：取固相合成的利拉魯肽粗肽溶于乙腈水溶液中獲得粗肽溶液；

步驟2：取所述粗肽溶液，以八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以含有0.1～0.2％三氟醋酸的異丙醇水溶液為A相，含有0.1～0.2％三氟醋酸的乙腈為B相，梯度為20～40％B→40～60％B，進行第一HPLC純化，線性梯度洗脫，收集目的峰獲得第一餾分；

步驟3：取所述第一餾分，以氰基硅烷鍵合硅膠為固定相，以質量濃度為0.05～0.15％高氯酸的水溶液為A相，質量濃度為0.05～0.15％高氯酸的乙腈為B相，梯度為40％B→70％B，進行第二HPLC純化，線性梯度洗脫，收集目的峰獲得第二餾分；

步驟4：取所述第二餾分，以八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以質量濃度為0.01～0.06％氨水的水溶液為A相，色譜純乙腈為B相，梯度為30％B→60％B，進行第三HPLC純化，線性梯度洗脫，收集目的峰獲得第三餾分；

步驟5：取所述第三餾分經(jīng)減壓旋蒸濃縮、冷凍干燥，即得。

2.根據(jù)權利要求1所述的純化方法，其特征在于，所述乙腈水溶液中乙腈與水的體積比為10～30∶70～90。

3.根據(jù)權利要求1所述的純化方法，其特征在于，所述異丙醇水溶液中異丙醇與水的體積比為15～35∶65～85。

4.根據(jù)權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟2、步驟3或步驟4中，所述第一HPLC純化、所述第二HPLC純化或所述第三HPLC純化的流速為55～2000ml/min。

5.根據(jù)權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟2、步驟3或步驟4中，所述第一HPLC純化、所述第二HPLC純化或所述第三HPLC純化的流速為55～500ml/min。

6.根據(jù)權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟2或步驟3中所述線性梯度洗脫時間為40min。

7.根據(jù)權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟4中所述線性梯度洗脫時間為30min。

8.根據(jù)權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟5中所述減壓旋蒸濃縮后濃度為50～70mg/ml。

9.根據(jù)權利要求1所述的純化方法，其特征在于，所述固相合成為在活化劑系統(tǒng)的存在下，由樹脂固相載體和N端Fmoc保護的甘氨酸偶聯(lián)得到Fmoc-Gly-樹脂；通過固相合成法，按照利拉魯肽主鏈肽序依次偶聯(lián)具有N端Fmoc保護且側鏈保護的氨基酸，其中賴氨酸側鏈采用Alloc保護；脫除賴氨酸側鏈保護基Alloc；通過固相合成法，在賴氨酸側鏈偶聯(lián)Palmitoyl-Gllu-OtBu；裂解，脫除保護基和樹脂得到利拉魯肽粗肽。