[發明專利]魚干擾素的制備及純化方法

無效

• 申請號: 201210029686.8
• 申請日: 2012-02-10
• 公開（公告）號: CN102533836A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 夏春;李奇潤;張琳
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C07K14/555;C07K14/56;C07K1/36;C07K1/18;C07K1/16
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種制備魚干擾素的方法，包括以下步驟：

1)將魚干擾素的成熟肽基因轉入原核表達菌株中得到表達所述魚干擾素的成熟肽基因的包涵體；

2)提取步驟1)得到的所述包涵體，加入到復性液中使所述包涵體復性；

3)分離純化步驟2)得到的復性的所述包涵體，得到所述魚干擾素；

所述復性液為由100mM?Tris·Cl、400mM?L-精氨酸、2mM?EDTA、5mM還原型谷胱甘肽和0.5mM氧化型谷胱甘肽組成的水溶液；所述復性液的pH為8.0。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟1)中所述原核表達菌株為Rosetta(DE3)。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述魚干擾素的成熟肽基因通過如下重組質粒轉入所述原核表達菌株中：所述魚干擾素的成熟肽基因連接到質粒pET-21a(+)上得到的表達所述魚干擾素的成熟肽基因的重組質粒。

4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟2)中所述復性是在4℃條件下進行的，且所述包涵體在所述復性液中的濃度為120μg/ml。

5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟3)中所述分離純化是將所述復性的所述包涵體首先經過分子篩分離得到含有所述魚干擾素的組分，然后將所述組分進行離子交換層析，得到所述魚干擾素。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述分子篩所使用的介質為Superdex75，洗脫液為pH8.0的20mM的Tris溶液，層析柱的柱長度與柱內徑之比為30∶1。

7.根據權利要求1-6中任一所述方法，其特征在于：所述魚干擾素為石斑魚α干擾素、虹鱒α干擾素、斑馬魚干擾素、草魚干擾素和牙鲆干擾素。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述石斑魚α干擾素的成熟肽的氨基酸序列為序列表中的序列2，所述虹鱒α干擾素的成熟肽的氨基酸序列為序列表中的序列4。

9.根據權利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述石斑魚α干擾素的成熟肽的基因序列為序列表序列1的第4位至第483位的核苷酸序列，所述虹鱒α干擾素的成熟肽的基因序列為序列表序列3的第4位至第495位的核苷酸序列。