[發明專利]一種阿托西班的純化方法

有效

• 申請號: 201210028890.8
• 申請日: 2012-02-09
• 公開（公告）號: CN102584953A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 趙忠衛;劉建;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;C07K1/36;C07K1/16;C07K1/20
• 代理公司: 深圳市深佳知識產權代理事務所(普通合伙) 44285
• 代理人: 唐華明

技術領域

本發明屬于藥物化學技術領域，尤其涉及一種阿托西班的純化方法。

背景技術

阿托西班，英文名Atosiban，化學名稱為：1-(3-硫醇丙醇酸)-2-(0-乙基-D酪氨酸)-4-L-蘇氨酸-8-L-鳥氨酸-催產素。阿托西班是人工合成的環狀多肽，肽鏈中包含三個非天然氨基酸D-Tyr(Et)，Mpa和Orn及一對在Mpa與Cys之間成環的二硫鍵，分子式為C₄₃H₆₇N₁₁O₁₂S₂，分子量為994.19，其結構式如下：

阿托西班是婦產科藥物中的一種突破產品，它是一種催產素類似物，是子宮內基蛻膜、胎膜上受體的催產素競爭性拮抗劑，可以直接與催產素競爭催產素受體，抑制催產素和催產素受體結合，從而直接抑制催產素作用于子宮，抑制子宮收縮；也可以抑制磷脂酰肌醇的水解作用，阻斷第二信使的生成以及Ca2+的活動，從而間接抑制子宮對催產素的反應，使子宮收縮得到抑制，達到保胎的目的。在過去的幾年，許多臨床試驗已經評估其療效和安全性。阿托西班能快速地抑制宮縮，延長妊娠，推遲不足月分娩，而對母親，胎兒和嬰兒沒有不良影響。因此阿托西班在臨床上有很好的應用前景，具有很高的開發價值。

目前，國內外關于阿托西班合成工藝方法的報道有很多。如通過Boc保護的甘氨酸(Gly)和氯甲基樹脂制備得到氨基酸樹脂，然后通過循環縮合偶聯其余的保護氨基酸得到肽樹脂，肽樹脂經氨解后得到全保護肽，通過鈉氫脫解去側鏈保護集團，進行碘環化得到目的肽。再如用TEA裂解得到酰胺鍵的RinkAminde樹脂作為起始樹脂，選用Fmoc固相合成方法。然而，上述方法所得阿托西班目的肽純度均較低，達不到產業化要求，應用價值不高。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種阿托西班的純化方法。

為實現本發明的目的，本發明采用如下技術方案：

一種阿托西班的純化方法，包括以下步驟：

步驟1、以50v/v％～100v/v％的醋酸水溶液溶解阿托西班粗肽，過濾收集濾液，按照不小于阿托西班粗肽重量的2％的比例加入三價鐵離子鹽，然后用水將粗肽溶液中的醋酸比例稀釋到50v/v％以下；

步驟2、高效液相色譜法分離步驟1所得粗肽溶液，以十八烷基硅烷或八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，步驟1所得粗肽溶液上樣后，以高氯酸鹽水溶液和乙腈的混合溶液為流動相，在乙腈體積比20％～40％范圍內線性梯度洗脫，收集洗脫液，得到阿托西班高氯酸鹽溶液，其中所述高氯酸鹽水溶液為pH2.5～pH3.2的高氯酸鹽體積比為0.1v/v％～0.8v/v％的溶液；

步驟3、采用反相高效液相色譜法將步驟2得到的阿托西班高氯酸鹽溶液轉成醋酸鹽溶液，即得。

本發明所述阿托西班粗肽是指采用液相合成法或固相合成法以及其它方法制得的、未經過精制處理的阿托西班或者純度不能滿足藥用的阿托西班。

優選的，本發明步驟1所述50v/v％～100v/v％的醋酸水溶液以不大于100g/L濃度溶解阿托西班粗肽。在一個具體實施例中，所述阿托西班粗肽的濃度為100g/L，即每100g阿托西班粗肽加入1L?50v/v％～100v/v％的醋酸水溶液。

本發明所述純化方法步驟1先將阿托西班粗肽溶解，然后以三價鐵離子鹽作為還原劑對阿托西班粗肽溶液進行處理，除去其中的未氧化完全的雜質。其中所述三價鐵離子鹽優選為氯化鐵或硫酸鐵。

本發明所述三價鐵離子鹽的加入量不小于阿托西班粗肽重量的2％，即每100g阿托西班粗肽加入2g或2g以上的三價鐵離子鹽。優選的，所述三價鐵離子鹽的加入量為阿托西班粗肽重量的4％～8％，即每100g阿托西班粗肽加入4～8g三價鐵離子鹽。

本發明所述純化方法，在三價鐵離子鹽還原劑對阿托西班粗肽溶液進行處理后用水將粗肽溶液中的醋酸比例稀釋到50v/v％以下。優選的，所述稀釋后的粗肽溶液中醋酸的比例為30v/v％～40v/v％。

本發明所述純化方法步驟2利用高效液相色譜法分離步驟1所得粗肽溶液，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，步驟1所得粗肽溶液上樣后，以高氯酸鹽水溶液和乙腈的混合溶液為流動相洗脫，收集洗脫液，得到阿托西班高氯酸鹽溶液。

本領域技術人員可以根據純化阿托西班粗肽的量，選擇不同規格大小(柱子直徑×長度)的色譜柱純化如5cm×25cm規格色譜柱、15cm×25cm規格色譜柱、30cm×25cm規格色譜柱或45cm×25cm規格色譜柱。