[發明專利]一種用于防治棉鈴疫病的萎縮芽孢桿菌及其微生物菌劑

有效

• 申請號: 201210028087.4
• 申請日: 2012-02-09
• 公開（公告）號: CN102747005A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 鹿秀云;馬平;李社增;郭慶港;李寶慶
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00;A01P3/00;C12R1/07
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 胡長遠

技術領域

本發明屬于農業微生物領域，具體涉及一種用于防治棉鈴疫病的萎縮芽孢桿菌和含有該萎縮芽孢桿菌的微生物菌劑，以及它們在防治棉鈴疫病上的應用。?

背景技術

棉鈴疫病是一種嚴重的棉花病害，由苧麻疫霉(Phytophthora?boehmeriae?sawada)引起，它不僅直接為害棉鈴，而且為其它病原菌提供了侵染條件。防治棉鈴疫病的方法主要是推株并壟、早摘爛鈴等栽培措施和化學藥劑防治。目前，我國種植棉花的經濟效益較低，而且人工費較高，農民不愿投入太多精力來推株并攏；早摘爛鈴只能保住部分產量，不足以防控棉鈴疫病；化學藥劑雖然防治效果較好，但存在容易產生抗藥性，化學藥劑價格較貴，增加生產成本，以及環境污染等問題。因此，亟需尋找一種省時省力、高效并且成本低廉的防治方法。?

利用有益微生物對植物病害進行生物防治，因具有針對性強、防效高且環保等優點越來越受到重視。特別是在蔬菜氣傳病害和作物土傳病害上應用較多。有關棉鈴疫病的生物防治方面研究很少。馬平等(馬平等.生物防治通報.1993.9(3))發現木霉菌和腐霉菌對棉鈴疫病具有一定防治效果，并篩選到生防細菌MB-3和MB-7，其發酵液10倍稀釋液對棉鈴疫病田間防治效果分別為34.9％和45.4％(馬平等.中國生物防治.1998.14(2))。?

芽孢桿菌(Bacillus)具有分布廣、易分離培養、能產生抗逆性較強的芽孢、貯藏期長和使用方便等優點，是一種理想的生防微生物，相比其他類型的生防因子，更有利于菌劑的生產，劑型加工，在環境中存活、定殖與繁殖。因此，篩選對病原菌具有抑制作用的芽孢桿菌是防治有關植物病害的最有效方法之一。?

發明內容

本發明目的在于提供一種用于防治棉鈴疫病的萎縮芽孢桿菌菌株，該菌株具有高效、廣譜殺菌活性等優點。?

本發明第二目的在于提供一種微生物菌劑。?

本發明第三目的在于提供上述微生物菌劑的制備方法。?

本發明第四目的在于提供上述萎縮芽孢桿菌菌株在防治棉鈴疫病上的用途。?

本發明第五目的在于提供上述微生物菌劑在防治棉鈴疫病上的用途。?

本發明通過以下技術方案實現：?

一種萎縮芽孢桿菌(Bacillus?atrophaeus)菌株HMB22922，己于2011年12月20日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所)，保藏編號為CGMCC?No.5614。?

一種微生物菌劑，其活性成分為萎縮芽孢桿菌HMB22922菌體和它的胞外代謝產物。?

上述微生物菌劑可以為液體制劑。?

上述微生物菌劑的制備方法，包括如下步驟：菌種活化，種子液制備和發酵培養。?

上述微生物菌劑的制備方法，具體包括如下步驟：?

(1)菌種活化：將低溫保存的HMB22922菌株在LB平板培養基上活化，挑取單菌落在LB斜面培養基上30℃培養24～36小時，得活化的菌株；?

(2)種子液制備：用無菌的接種環刮取一環步驟(1)活化的菌株接種到100mLLB液體培養基中，在26～34℃、搖床轉速為170～210rpm條件下培養22～25小時，得種子液；?

(3)發酵培養：按照體積比為0.5％～3.0％的比例將步驟(2)的種子液接入到蔗糖豆餅粉培養基(pH值為5.8～6.2)中，在溫度為28～34℃、搖床轉速為170～210rpm的條件下發酵培養36～54h，得發酵液；所述的蔗糖豆餅粉培養基，其組成成分及其重量百分比為：蔗糖2.0～3.0％，豆餅粉1.6～2.4％，NaCl?0.1～0.2％，CaCO₃?0.1～0.3％，KH₂PO₄?0.01～0.03％和MgSO₄·7H₂O?0.01～0.03％，其余為水；?

(4)檢測發酵液中菌體和芽孢數量，待發酵液中成熟芽孢占到芽孢和菌體總數的90％時停止發酵培養；所得即為HMB22922菌株的液體制劑。?

上述制備方法步驟(2)和(3)中所述的溫度優選為30～32℃；所述的搖床轉速優選為210rpm；所述的培養時間優選為48h。?

所述的LB平板培養基、LB斜面培養基和LB液體培養基等按照常規方法制備。?