[發明專利]一種用于防治黃瓜霜霉病的枯草芽孢桿菌及其微生物菌劑

有效

• 申請號: 201210028079.X
• 申請日: 2012-02-09
• 公開（公告）號: CN102586142A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 鹿秀云;馬平;李社增;郭慶港;李寶慶
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/125
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 胡長遠

技術領域

本發明屬于農業微生物領域，具體涉及一種用于防治黃瓜霜霉病的枯草芽孢桿菌和含有該枯草芽孢桿菌的微生物菌劑，以及它們在防治黃瓜霜霉病上的應用。

背景技術

黃瓜霜霉病是由古巴假霜霉菌(Pseudoperonospora?cubensis?Rostow)引起的侵染性氣傳病害，給黃瓜生產帶來巨大威脅。防治黃瓜霜霉病的方法主要有抗病育種、化學防治和生態防治(如高溫悶棚等)等。由于黃瓜霜霉病為多基因控制的數量性狀遺傳，抗病育種難以進行且抗性容易喪失；化學防治存在容易產生抗藥性和對人、環境污染的問題；而生態防治的高溫悶棚需要黃瓜苗齡、長勢和天氣情況都合適的條件下才能進行，應用受條件限制。近年來，由于生物防治方法對人、畜安全，對環境沒有污染，且對防治對象的針對性強，效果好，因此，生物防治已成為防治黃瓜霜霉病的重要途徑。

生物防治黃瓜霜霉病的方法主要包括利用植物提取物、植物的抗病性誘導和生防菌防治。已報道的用于防治黃瓜霜霉病的植物提取物近10余種，但是植物提取物的提取過程繁瑣、生產成本高，人工合成單一物質使用后病原菌容易產生抗藥性等缺點，使該方法難以應用。利用生防菌防治已報道有枯草芽孢桿菌ZH-8液體制劑(張淑梅等.生物技術.2004(4))和非致病性鐮刀菌FO47和FO47B10(楊猛等.西北農林科技大學學報(自然科學版)；2005年05期)等。

芽孢桿菌(Bacillus)具有分布廣、易分離培養、能產生抗逆性較強的芽孢、貯藏期長和使用方便等特點，是一種理想的生防微生物，相比其他類型的生防因子，更有利于菌劑的生產，劑型加工，在環境中存活、定殖與繁殖。因此，篩選對病原菌具有抑制作用的芽孢桿菌是防治有關植物病害的最有效方法之一。

發明內容

本發明目的在于提供一種用于防治黃瓜霜霉病的枯草芽孢桿菌菌株，該菌株具有高效、廣譜殺菌活性優點。

本發明第二目的在于提供一種微生物菌劑。

本發明第三目的在于提供上述微生物菌劑的制備方法。

本發明第四目的在于提供上述枯草芽孢桿菌菌株在防治黃瓜霜霉病上的用途。

本發明第五目的在于提供上述微生物菌劑在防治黃瓜霜霉病上的用途。

本發明通過以下技術方案實現：

一種枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)菌株HMB19198，已于2011年12月20日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.5613。

利用上述枯草芽孢桿菌HMB19198生產的微生物菌劑，其活性成分為枯草芽孢桿菌HMB19198菌體和它的胞外代謝產物。

上述微生物菌劑可以為液體制劑。

上述微生物菌劑的制備方法，包括如下步驟：菌種活化，種子液制備和發酵培養。

上述微生物菌劑的制備方法，具體包括如下步驟：

(1)菌種活化：將低溫保存的HMB19198菌株在LB平板培養基上活化，挑取單菌落在LB斜面培養基上30℃培養24～36小時，得活化的菌株；

(2)種子液制備：用無菌的接種環刮取一環步驟(1)活化的菌株接種到100mLLB液體培養基中，在26～34℃、搖床轉速為170～210rpm的條件下培養22～25小時，得種子液；

(3)發酵培養：按照體積比為0.5％～3.0％的比例將步驟(2)的種子液接入到蔗糖豆餅粉培養基(pH值為5.8～6.2)中，在溫度為28～34℃、搖床轉速為170～210rpm的條件下發酵培養36～54h，得發酵液；所述的蔗糖豆餅粉培養基，其組成成分及其重量百分比為：蔗糖2.0～3.0％，豆餅粉1.6～2.4％，NaCl?0.1～0.2％，CaCO₃?0.1～0.3％，KH₂PO₄?0.01～0.03％和MgSO₄·7H₂O?0.01～0.03％，其余為水；

(4)檢測發酵液中菌體和芽孢數量，待發酵液中成熟芽孢占到芽孢和菌體總數的90％時停止發酵培養；所得即為HMB19198菌株的液體制劑。

上述制備方法步驟(2)或(3)中所述的溫度優選為30～32℃；所述的搖床轉速優選為210rpm；所述的培養時間優選為48h。

所述的LB平板培養基、LB斜面培養基和LB液體培養基均按照常規方法制備。