[發明專利]抗HBV的化合物的篩選方法有效
| 申請號： | 201210024711.3 | 申請日： | 2012-02-03 |
| 公開（公告）號： | CN103243172A | 公開（公告）日： | 2013-08-14 |
| 發明（設計）人： | 左建平;南發俊;楊莉;童賢昆;張仰明;王桂鳳;唐煒 | 申請（專利權）人： | 中國科學院上海藥物研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/02;G01N33/68;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京金信立方知識產權代理有限公司 11225 | 代理人： | 朱梅;徐琳 |
| 地址： | 201203 上海*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | hbv 化合物 篩選 方法 | ||
1.一種抗HBV的化合物的篩選方法，其中，該方法以HBV核心蛋白C末端氨基酸序列為藥物作用靶點來篩選抗HBV的化合物，所述HBV核心蛋白C末端氨基酸序列至少包含STLPETTVVRRRDRGR。
2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述HBV核心蛋白C末端氨基酸序列為：
STLPETTVVRRRDRGRSPRRRTPSPRRRRSQSPRRRRSQSRESQC、
STLPETTVVRRRDRGRSPRRRTPSPRRRRSQ、
STLPETTVVRRRDRGRSPRRRTP或
STLPETTVVRRRDRGR。
3.根據權利要求1所述的方法，其中，所述方法包括以下步驟：
(a)通過PCR的方法構建含有所述HBV核心蛋白C末端氨基酸序列的真核表達質粒；
(b)用步驟(a)中所得質粒瞬時轉染肝癌細胞4～6小時后給予篩選化合物處理48～96小時；
(c)藥物處理后收集細胞，以非變性瓊脂糖凝膠電泳來篩選可誘導異常空載HBV核心顆粒包裝的化合物。
4.根據權利要求3所述的方法，其中，所述肝癌細胞包括Huh7細胞或HepG2細胞。
5.根據權利要求4所述的方法，其中，所述肝癌細胞為Huh7細胞。
6.根據權利要求3所述的方法，其中，所述步驟(b)中篩選化合物處理為：將轉染的肝癌細胞與篩選化合物共同培養。
7.根據權利要求3所述的方法，其中，所述步驟(c)具體為：經篩選化合物處理后收集細胞，取細胞裂解液上樣于1.8％瓊脂糖凝膠孔中，4℃電泳2～3小時；電泳結束后，虹吸法轉膜過夜；將所得樣品轉移至硝酸纖維素膜上，用抗HBc抗體檢測由篩選化合物誘導產生的異常核心顆粒。
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