[發(fā)明專利]大麥花藥快速培養(yǎng)法及所用培養(yǎng)基有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210024418.7 | 申請日： | 2012-02-03 |
| 公開（公告）號： | CN102577946A | 公開（公告）日： | 2012-07-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 楊建明;華為;汪軍妹;賈巧君;朱靖環(huán);尚毅;林峰;顧玉坤 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 杭州中成專利事務(wù)所有限公司 33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310021 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 大麥 花藥 快速 培養(yǎng) 所用 培養(yǎng)基 | ||
1.大麥花藥培養(yǎng)基，其特征是：包括預(yù)處理培養(yǎng)基、誘導(dǎo)培養(yǎng)基以及分化/生根培養(yǎng)基；
所述預(yù)處理培養(yǎng)基由以下含量的組分組成：
甘露醇175～185g/L，瓊脂14～16g/L，其余為蒸餾水；
所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的制備方法如下：
每升誘導(dǎo)基液先調(diào)節(jié)至pH為5.7～5.9，然后加入14～16g的瓊脂；接著進行高溫滅菌處理，待溫度回落至50～60℃時，再加入過濾滅菌后的濃度為740～760mg/ml的谷氨酰胺溶液、濃度為90～110mg/ml的肌醇溶液、濃度為0.35～0.45mg/ml的維生素B1溶液、濃度為0.9～1.1mg/ml的吲哚乙酸溶液和濃度為0.9～1.1mg/ml的6-芐基氨基嘌呤溶液各1ml；
所述誘導(dǎo)基液由以下含量的組分組成：
KNO31850～1950mg/L，NH4NO3160～170mg/L，CaCl2·2H2O?430～450mg/L，KH2PO4160～180mg/L，MgSO4·7H2O?360～380mg/L，NaFeEDTA?35～45mg/L，H3BO36.0～6.4mg/L，MnSO4·4H2O?22～22.5mg/L，ZnSO4·7H2O?8.5～9.0mg/L，Na2MoO4·2H2O?0.20～0.30mg/L，KI?0.80～0.90mg/L，CuSO4·5H2O?0.020～0.030mg/L，CoCl2·6H2O?0.020～0.030mg/L，麥芽糖90～110g/L，其余為蒸餾水；
所述分化/生根培養(yǎng)基的制備方法為：在每L?MS基本培養(yǎng)基內(nèi)加入蔗糖18～22g后，先調(diào)pH至6.4～6.6，再加入植物凝膠3.5～4.5g；最后高溫滅菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大麥花藥培養(yǎng)基，其特征是：
所述預(yù)處理培養(yǎng)基由以下含量的組分組成：
甘露醇182g/L，瓊脂15g/L，其余為蒸餾水；
所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的制備方法中：谷氨酰胺溶液的濃度為750mg/ml、肌醇溶液的濃度為100mg/ml、維生素B1(VB1)溶液的濃度為0.4mg/ml、吲哚乙酸(IAA)溶液的濃度為1.0mg/ml，6-芐基氨基嘌呤(BAP)溶液的濃度為1.0mg/ml；瓊脂的加入量為15g；
所述誘導(dǎo)基液由以下含量的組分組成：
KNO31900mg/L，NH4NO3165mg/L，CaCl2·2H2O?440mg/L，KH2PO4170mg/L，MgSO4·7H2O?370mg/L，NaFeEDTA?40mg/L，H3BO36.2mg/L，MnSO4·4H2O?22.3mg/L，ZnSO4·7H2O?8.6mg/L，Na2MoO4·2H2O?0.25mg/L，KI?0.83mg/L，CuSO4·5H2O?0.025mg/L，CoCl2·6H2O?0.025mg/L，麥芽糖100g/L，其余為蒸餾水；
所述分化/生根培養(yǎng)基的制備方法中：蔗糖的加入量為20g，植物凝膠的加入量為4g。
3.利用如權(quán)利要求1或2所述的大麥花藥培養(yǎng)基所進行的大麥花藥快速培養(yǎng)法，其特征是依次包括以下步驟：
1)、在田間取小孢子發(fā)育處于單核中期的麥穗，在無菌操作臺上滅菌、晾干后，用滅菌刀片取出葉鞘中的穗子，再用尖頭鑷子取出穗子里的花藥，放入位于培養(yǎng)皿內(nèi)的預(yù)處理培養(yǎng)基上，封上封口膜；20～25℃黑暗環(huán)境下培養(yǎng)3～5天；得預(yù)處理后花藥；
2)、將預(yù)處理后花藥轉(zhuǎn)移到位于培養(yǎng)皿內(nèi)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，用封口膜封好培養(yǎng)皿，20～25℃黑暗環(huán)境下培養(yǎng)4～5周；
3)、將步驟2)誘導(dǎo)所得的愈傷組織和苗轉(zhuǎn)移至分化/生根培養(yǎng)基上；于22～25℃光照培養(yǎng)，光照時間每天12小時，光照強度為40～60μmol/m2/s；培養(yǎng)3～4周后，得生根綠苗。
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