[發明專利]一種從綿羊毛囊組織中提取總RNA的方法

無效

• 申請號: 201210023764.3
• 申請日: 2012-02-03
• 公開（公告）號: CN103243085A
• 公開（公告）日: 2013-08-14
• 發明（設計）人: 余梅;柳廣斌;趙書紅;李新云;曹建華;李小平;李長春;朱猛進;陳若男
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

1.一種從綿羊毛囊組織中提取總RNA的方法，其特征在于以下步驟：

(1)現場采集：

a)取綿羊毛囊至裝有700μL?TRIzol的1.5mL錐形底離心管中，毛囊組織的收集量至毛囊組織總體積占TRIzol液體體積的1/3；

b)立刻用小型塑料研磨杵在離心管內研磨1min，向離心管內補充300μL?TRIzol使1.5mL離心管內的TRIzol總量達1mL；蓋好蓋子甩動離心管讓毛囊完全浸泡在TRIzol液體中，將離心管放入離心管盒內，即完成采集；

c)在避光條件下，于24小時內將研磨后裝有樣品的離心管放入-20℃暫時凍存；

(2)樣品運輸：

將裝有樣品的離心管從-20℃取出放入泡沫盒，同時放入足夠量的冰袋，密封后進行運輸，使保證運輸時冰袋中的冰不完全融化為準；

(3)樣品保存：

在室溫下解凍浸泡在TRIzol液體中的樣品，于4℃12000rpm離心10min，吸取TRIzol液體至新離心管，將TRIzol液體放入-80℃保存，保存期至少為1個月至毛囊RNA不被降解；

(4)RNA提取：

a)在室溫下解凍由步驟(3)中凍存的TRIzol樣品液體，向每1mLTRIzol樣品中加入200μL氯仿，劇烈震蕩混勻20s，于室溫下靜置5min；

b)于4℃12000rpm離心15min，得上清，取400μL所得的上清至新的離心管；

c)向所得的上清中加入400μL異丙醇，上下顛倒混勻10次，于室溫下靜置10min；

d)于4℃12000rpm離心10min，可見管底有白色沉淀，棄液體，保留管底的白色沉淀；

e)向離心管中加入1mL?75％濃度的乙醇溶液，用手指彈動離心管底，讓沉淀懸浮于液體之中；

f)于4℃7500rpm離心5min，棄液體，用槍頭吸干管底殘液，不要觸及沉淀，避免將沉淀吸走；

g)于室溫下晾干沉淀后，用RNase-Free?ddH₂0溶解沉淀，得到綿羊毛囊組織總RNA樣品。