[發(fā)明專利]一種人工脂質體的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210023252.7
• 申請日: 2012-02-02
• 公開（公告）號: CN102552145A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設計）人: 喬元彪
• 申請（專利權）人: 呂梁學院
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K47/24;A61K38/00;A61K38/38;A61K38/43;A61K49/00;A61P35/00;A61P31/18
• 代理公司: 太原科衛(wèi)專利事務所(普通合伙) 14100
• 代理人: 朱源

技術領域

本發(fā)明屬于藥學領域，涉及一種蛋白質藥物脂質體的制備方法，具體涉及一種人工脂質體的制備方法。

背景技術

由于脂質體獨特的物理、生理和藥理特征，如具有備整合親水性和疏水性藥物能力、生物適應性好、毒性低、無免疫系統(tǒng)響應及其在作用位點活性藥物的靶向緩釋能力等，因此，作為治療型或診斷型活性試劑，脂質體載體的研究一直以來得到廣泛的關注。自從發(fā)現脂質體以來，其產品的大小能夠從微米到納米有效地控制；部分載體系統(tǒng)通過表面改性后與多肽、蛋白質和抗體進行了功能性整合。目前，FDA機構已經批準如阿米卡星/HSPC/CH/DSPG，胞壁酰二肽/DSPC/PS（1:1）等25種以上的脂質體劑型藥物在臨床試驗，部分藥品已進入臨床應用階段。

脂質體的制備技術主要采取以下4種途徑：水相攪拌、超聲技術（探頭超聲和水浴超聲分散技術）、反向蒸發(fā)技術以及冷凍脫水干燥技術。脂質體藥物為兼具親水基團和疏水基團的產品，分別通過以下4種不同的途徑對靶向細胞發(fā)揮作用：網狀內皮組織中巨噬細胞和嗜中性粒細胞的內吞作用、藥物與細胞表面弱的疏水性（或靜電）等非選擇性作用以及藥物和細胞表面組分的選擇性作用、磷脂雙分子層插入血清細胞膜并釋放到細胞質中、脂質體轉移到細胞內膜或亞細胞器膜中。在以上情況中，較難判斷競爭性優(yōu)勢的作用途徑，同時對于1種以上的協(xié)同作用過程目前尚未清楚。

對于治療型和診斷型脂質體藥物，盡管開展了廣泛深入的研究工作。然而，在具體藥品的開發(fā)應用中，脂質體仍存在明顯的不足。例如，網狀內皮組織細胞對脂質體的生物降解速率很快，導致活性藥物組分很難達到穩(wěn)定、持久的緩釋和傳遞功效。為了克服以上的不足，在脂質體藥物的構建中成功采用了2類聚合材料的改性方法：通過親水性聚合材料如聚乙烯乙二醇（PEG）對現有的脂質體表面進行修飾；此外，可將預包裹的載藥脂質體整合到聚合物基質系統(tǒng)中，從而有效控制脂質體藥物的緩釋和傳遞。然而，在預包裹載藥脂質體與聚合基質的復合構建中，涉及的學科范圍廣泛同時技術要求嚴格，需要藥學、生物材料科學、化學、分子及細胞生物學相關的研究人員通力合作才能實現。

脂質體藥物體系具有穩(wěn)定性差、藥物半衰期短和體內藥物清除速率快等不足，使用親水性聚合材料改性后能夠明顯改善脂質體的藥理特性。這種方法兼具了載藥脂質體和包裹基質材料的優(yōu)點，藥物的穩(wěn)定性提高，同時持久的藥物傳遞能力增強。然而，使用親水性聚合材料的最大缺點在于生物適應性差。為實現載藥脂質體與聚合材料的復合構建，須將脂質體暴露在有機溶劑并進行熱超聲，導致藥物的生物活性明顯下降。

當前，脂質體的構建耦合聚合基質的包裹技術是國內外制藥行業(yè)的研究熱點。這種研究不僅有望提高藥物穩(wěn)定性和持久的緩釋控制，維持體內藥物水平和延長用藥的時間間隔，減小藥物對腸胃道等組織的毒副作用；同時有望高效保留藥物活力，保證臨床的治療效果。為此，構建并開發(fā)了不同的技術用來將載藥脂質體包裹進聚合性骨架結構中。總體來看，這種研究仍處于基礎的探索階段，距離臨床的成功應用仍有大量的技術難題等待解決。

對現有脂質體載體的改性進行技術革新是制藥行業(yè)的另一個研究熱點。磷脂類（PC）脂質體在國內外的報道已有很多，但PC如蛋黃卵磷脂（EPC）或大豆卵磷脂（SPC）具有構型多變（錐形和圓柱形異構）導致形成的載藥脂質體的穩(wěn)定性較低。在常見的口服或靜脈滴注等給藥途徑中，盡管脂質體藥物的藥效高，但體液生理條件如酶催化使得載體的穩(wěn)定性差，直接導致了藥物水平的維持和清除時間很短（通常維持數小時），因此在臨床中需要持續(xù)給藥。專利申請人曾將EPC和SPC分別與無機離子進行雜交，得到了穩(wěn)定性好、生物適應性高、等電點適中、分離和純化過程簡單且不溶的膠束納米材料（參見專利CN102107131A）。相對于其他的脂質體系統(tǒng)，載體材料的制備具有條件十分溫和、工藝流程簡單等優(yōu)點，產品分散性高、粒度小（約5nm，與蛋白質和藥物分子的幾何尺寸具有相同數量級）且分布均勻。

蛋黃卵磷脂鋯（Zr(EPC)2）和大豆卵磷脂鋯（Zr(SPC)2）作為脂質體載體，具有以下的優(yōu)點：1.?脂質體制備條件非常溫和，避免采用有機溶劑和熱超聲，有效地預防了蛋白質分子的構型變化和活力下降；2.?脂質體藥物與基質、底物的分離過程簡單，離心和洗滌操作可方便地實現了脂質體納米顆粒的純化；3.?穩(wěn)定性高和機械強度適中的載體是保證脂質體藥物對于溶劑和加熱等條件維持穩(wěn)定的前提；4.?載體對蛋白質藥物的吸附容量大，且通過條件選擇可進行人為控制；5.?載體與蛋白質的幾何尺寸相似，吸附動力學同時兼具主動和被動2個過程，產品的制備周期短。