[發(fā)明專利]一種顯微染色鑒別冬蟲夏草粉的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210021913.2
• 申請日: 2010-04-21
• 公開（公告）號: CN102589956A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張雪峰;徐麗
• 申請（專利權(quán)）人: 張雪峰
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N21/84
• 代理公司: 成都虹橋?qū)＠聞?wù)所 51124
• 代理人: 劉世平

本申請是申請日為2010年04月21日、申請?zhí)枮?01010151881.9、發(fā)明名稱為《顯微染色鑒別冬春夏草粉的方法》的發(fā)明專利申請的分案申請。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥材鑒別領(lǐng)域，具體涉及一種顯微染色鑒別冬蟲夏草粉的方法。

背景技術(shù)

在我國傳統(tǒng)的醫(yī)藥中，冬蟲夏草一直就是高級滋補(bǔ)品，藥用地位十分顯著，與人參、鹿茸并稱為“三大補(bǔ)品”。隨著各相關(guān)學(xué)科領(lǐng)域的深入研究，近年來不斷有蟲草新的種類、新的分布的報(bào)道，化學(xué)成分不斷被分離、鑒定，而有關(guān)免疫、抗腫瘤等多方面的藥理、藥效學(xué)研究充分證實(shí)了冬蟲夏草的藥效。由于冬蟲夏草的特殊生長環(huán)境、特殊的地理環(huán)境及重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，使得人們的研究興趣倍加強(qiáng)烈，尤其是對冬蟲夏草及其代用品的研究更是十分活躍。

目前市場流通與銷售的純冬蟲夏草粉，由于被制成了一定的劑型，很難區(qū)分真?zhèn)危m然可以用檢驗(yàn)儀器的手段，證明冬蟲夏草的若干標(biāo)記物的存在，如蟲草素與腺苷的含量，但這些標(biāo)記物容易買到，而且并不貴，理論上可以用來作添加劑，所以理化檢驗(yàn)既不能檢出雜質(zhì)，也不能辨別贗品。由于蟲草粉價(jià)格高昂，為了保護(hù)消費(fèi)者的利益，本領(lǐng)域需要建立準(zhǔn)確鑒定純冬蟲夏草粉真?zhèn)蔚姆椒ā?/p>

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的是市場流通與銷售的純冬蟲夏草粉難于分真?zhèn)蔚募夹g(shù)問題。本發(fā)明解決該問題的技術(shù)方案是提供一種準(zhǔn)確鑒別冬蟲夏草粉的方法。該方法包括以下步驟：取待檢冬蟲夏草粉，染色制成涂片；所述染色為分別進(jìn)行蘇木精-伊紅-碘液染色、番紅-固綠染色、斯氏染液-碘液染色中的至少一種染色；

將制成的涂片于顯微鏡下進(jìn)行顯微觀測，如每片均能清晰觀察到冬蟲夏草的特有結(jié)構(gòu)，且沒有碘液染色下的明顯藍(lán)色斑點(diǎn)，并且沒有觀測到明顯的植物組織，即可判斷為純冬蟲夏草粉，否則為不純的冬蟲夏草粉。

其中，本發(fā)明鑒別純冬蟲夏草粉的方法中所述的冬蟲夏草的特有結(jié)構(gòu)為冬蟲夏草的蟲體菌絲體、冬蟲夏草的蟲體表皮層、冬蟲夏草的蟲體肌肉組織、冬蟲夏草的子座菌絲體或冬蟲夏草的子座表皮層中的至少4種。

其中，本發(fā)明鑒別純冬蟲夏草粉的方法中所述的冬蟲夏草的染色方法為滴加蘇木染液10min染色后水洗5min，然后依次分別用50％、75％、95％乙醇梯度洗，然后滴加伊紅染液染色5min，然后滴加碘液染色5min，然后依次分別用50％、75％、95％、100％的乙醇梯度洗滌，后置于二甲苯液中5～10min以完成染色。

其中，本發(fā)明鑒別純冬蟲夏草粉的方法中所述的冬蟲夏草的染色方法為將涂片用50％乙醇浸泡后滴加番紅染液25min染色，然后依次分別用50％、75％、95％乙醇梯度洗滌，然后滴加固綠染色1min，然后依次分別用95％、95％、100％、100％的乙醇梯度洗滌，后置于二甲苯與100％乙醇混合液中5～10min，再置于純二甲苯液中5～10min以完成染色。

其中，本發(fā)明鑒別純冬蟲夏草粉的方法中鑒別冬蟲夏草的特有結(jié)構(gòu)時(shí)，可以用同種方式染色的具有冬蟲夏草特有結(jié)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)切片為標(biāo)準(zhǔn)。還可以用冬蟲夏草的蟲體橫切片和冬蟲夏草子座橫切片作為參考標(biāo)準(zhǔn)。以防止檢驗(yàn)人員由于經(jīng)驗(yàn)不足產(chǎn)生誤判。

其中，本發(fā)明鑒別純冬蟲夏草粉的方法中對每批待檢的純冬蟲夏草粉物料取樣4～10份。一般取6份進(jìn)行檢測，以提高準(zhǔn)確度。對每批待檢的純冬蟲的每張涂片中的每1張上都要有至少4種特有結(jié)構(gòu)才為真品。

具體而言，本發(fā)明方法可采用以下的詳細(xì)實(shí)施過程：

取待檢冬蟲夏草粉4～10份，一般取6份。將取的樣染色制成涂片；所述染色為分別進(jìn)行蘇木精-伊紅染色、番紅-固綠染色、斯氏染液染色中的至少一種染色，并進(jìn)行碘液染色；

其中蘇木精-伊紅染色的方法為滴加蘇木染液10min染色后水洗5min，然后依次分別用50％、75％、95％乙醇梯度洗滌，然后滴加伊紅染液染色5min，然后滴加碘液染色5min，然后依次分別用50％、75％、95％、100％的乙醇梯度洗滌，后置于二甲苯液中5～10min以完成染色。

其中番紅-固綠染色的方法為將涂片用50％乙醇浸泡后滴加番紅染液25min染色，然后依次分別用50％、75％、95％乙醇梯度洗滌，然后滴加固綠染色1min，然后依次分別用95％、95％、100％、100％的乙醇梯度洗滌，后置于二甲苯與100％乙醇混合液中5～10min，再置于純二甲苯液中5～10min以完成染色。