[發明專利]克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇三合一酶聯免疫法及專用試劑盒與試劑盒的檢測法

有效

• 申請號: 201210020624.0
• 申請日: 2012-01-30
• 公開（公告）號: CN103226146A
• 公開（公告）日: 2013-07-31
• 發明（設計）人: 羅奕銘
• 申請（專利權）人: 廣州瑞森生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及β興奮劑檢測技術領域，具體來說是一種克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇一次性檢測的酶聯免疫法及其專用檢測試劑盒與試劑盒的檢測方法。?

背景技術

隨著人們的生活水平的不斷提高，人們開始對自己的身體健康也越來越關注，在日常生活中，人們會經常烹食肉類食品，來增強自身的免疫性和補充營養，但在烹食肉類食品時，人們往往會擔心一個問題——“肉類食品中是否含有β興奮劑(瘦肉精)”，β興奮劑是一種能夠促進瘦肉生長的藥物添加劑，例如鹽酸克倫特羅即鹽酸鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等。其能使豬提高生長速度，增加瘦肉率，且可使豬毛色紅潤光亮，賣相好；屠宰后，肉色鮮紅，脂肪層極薄，往往是皮貼著瘦肉，瘦肉豐滿，但對人體會產生副作用，輕則導致心律不整，嚴重一點就會導致心臟病。?

目前檢測β興奮劑主要有方法有色譜技術和免疫分析技術等方法。?

色譜法包括高效液相色譜法和氣質聯用色譜法。高效液相色譜(HPLC)法的優點是檢測精密度高，假陽性率低，但存在樣品處理時間長、檢測過程繁瑣、儀器昂貴、難于操作等缺點，在實際應用中受到一定的限制。而氣質聯用法(GC-MS)檢測前需要對分子上的羥基、氨基等極性基團衍生化，難以作為常規方法應用，不能進行現場檢測。?

免疫分析技術包括放射性免疫分析技術、金標免疫分析和酶免疫分析技術技術等。放射性免疫分析技術具有特異性強、靈敏度高、準確、快速、操作簡便、易于標準化等優點，但其所用儀器昂貴，且使用的放射性同位素存在輻射和污染，其廢棄物不易處理，限制了此種方法的廣泛應用；金標免疫分析技術能對大量樣品進行篩選，但其假陽性率較高，檢測靈敏度欠缺，穩定性不足，無法提供準確的結果。?

發明內容

本發明的目的是提供一種克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇一次性檢測的酶聯免疫法及?其專用檢測試劑盒與試劑盒的檢測方法，以克服目前現有技術存在的上述不足，靈敏度高、穩定性好，準確可靠，大大簡化操作步驟和反應時間，且降低成本，適合大量樣品的篩查。?

本發明的目的是通過以下技術方案來實現：?

一種克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇一次性檢測的酶聯免疫檢測方法，其特征在于：在酶標板上預包被上單克隆抗體，待檢測樣品中的克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺，還有酶標抗原一起競爭結合包被的單克隆抗體后，用顯色劑顯色，待檢測樣品中的克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇含量與待檢測樣品的百分吸光度值呈反比，與標準曲線比較即可得出待檢測樣品中克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺含量，所述標準曲線是以克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇標準品濃度百分吸光度值為縱坐標，以克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇標準品濃度的對數值為橫坐標繪制而成，所述預包被的單克隆抗體能同時對克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇發生交叉反應，所述百分吸光度值按下式計算：?

其中B是標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值；B0是第一個標準溶液的平均吸光度值。?

所述酶標抗原是通過辣根過氧化物酶HRP標記克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺而得到，所述待檢測樣品為待檢豬尿、豬肝或血液血清的待檢測樣品，豬尿待檢測樣品若是清亮尿樣，就直接測定，如尿樣渾濁須過濾或離心直至清亮，暫不使用尿樣待檢測樣品應冷凍保存，避免反復凍融采取，所述酶標抗原是通過辣根過氧化物酶HRP標記克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺而得到，所述血液血清待檢測樣品處理方法為：取血清，加入酶標記物稀釋液稀釋，震蕩混合均勻即可。?

一種專用于前述檢測方法的克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇三合一的酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括：1)權利要求1所述的預包被上單克隆抗體的酶標板；2)權利要求1所述的克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇三合一標準品溶液；3)濃縮酶標記物；4)酶標記物稀釋液；5)顯色液；6)濃縮洗液；7)終止液；所述酶標記物是在低pH條件下直接氧化辣根過氧化物酶HRP，辣根過氧化物酶HRP經NaIO₄氧化后形成的醛化酶與克倫特羅、沙丁?胺醇、萊克多巴胺三種物質的抗原分子的氨基相連，形成斯夫氏堿，進一步用NaBH₄還原生成穩定物質。?

所述預包被的單克隆抗體由合成好的完全抗原免疫小鼠，經骨髓細胞融合，培養，篩選出分泌抗體的雜交細胞株，雜交細胞株進行克隆化得到。?

所述檢測試劑盒的克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇交叉反應率分別為：100％、80％、80％，所述檢測試劑盒檢測尿液和血清的回收率都為60～140％。?